RV10旋转蒸发仪（德国IKA公司）, SHB-III型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸公司）, SCIENTZ-12N型冷冻干燥机（宁波新芝生物科技股份公司）, AV-400核磁共振仪（美国布鲁克公司）, 7890B-5977B型气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司）, Exion-X500R超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱仪（美国ABSciex公司）, 傅里叶变换红外光谱仪SpectrumFrontier（美国PerkinElmer公司）, Milli-Q超纯水机（美国Millipore公司）, GF254薄层层析硅胶（青岛海洋硅胶厂）。

甲醇、乙腈（色谱纯, 德国 Merck公司）; 甲酸（色谱纯, 美国 Sigma-Aldrich 公司）; 正己烷、乙酸乙酯、甲醇（色谱纯, 成都科隆化学品公司）; 氘代甲醇（美国Cambridge Isotope Laboratories公司）; 超纯水（实验室自制）。

待测检材为某吸毒现场查获的未知成分烟叶。取样品10.0 g用三氯甲烷完全浸泡后涡旋振荡2 min, 过滤提取液, 将提取液旋蒸浓缩后用正己烷溶解。用硅胶层析法纯化目标成分, 依次用3 BV（bed volume）正己烷、3 BV正己烷-乙酸乙酯（4∶ 1, 体积比）、3BV正己烷-乙酸乙酯（1∶ 1, 体积比）洗脱, 每0.5 BV收集一个馏分。以正己烷∶ 乙酸乙酯（1∶ 1, 体积比）为展开剂, 点样于GF254硅胶板, 在254 nm紫外光下观察展开结果, 对比组分, 合并相同馏分、浓缩、冻干, 得到样品约13.0 mg。

1.3.1 气相色谱-质谱联用仪条件

色谱条件：HP-5MS毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）; 载气为高纯氦气, 进样口温度为280 ℃, 分流比为10∶ 1, 流速1 mL/min; 初温100 ℃保持2 min, 以20 ℃/min程序升温至280 ℃保持4 min, 实验用时16 min。

质谱条件：离子源温度为230 ℃; 传输线温度为250 ℃; 离子源为EI源, 电压70 ev; 溶剂延迟为2.5 min; 采用全扫描模式（Scan）; 扫描范围为45~450 amu。

1.3.2 红外光谱条件

采用DTGS检测器, 3次金刚石衰减全反射（UATR）扫描。扫描范围4 000~650 cm^-1, 累加扫描8次, 分辨率4 cm^-1, OPD速度为0.2 cm^-1/s。

1.3.3 液相色谱串联高分辨质谱条件

色谱条件：色谱柱为PhenomenexKinetex C18柱（2.1 mm×100 mm×2.6 μm）; 进样量为1 μL; 流动相为0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）, 梯度洗脱模式, B相初始浓度为10%, 在1~5 min内流动相B由20%增加到95%并保持5 min; 流速为0.3 mL/min; 进样量为1 μL。

质谱条件：ESI源。正离子检测模式：离子源温度为500 ℃; 气帘气241 kPa, 碰撞气48 kPa, 雾化器345 kPa, 加热器345 kPa; 喷雾电压5.5 kV; 质量扫描范围100~1000 Da; 去簇电压70 V, 去簇电压范围0~100 V; 碰撞能范围0~50 V, 累积时间0.25 s, 碰撞能为10、20、30、40 eV。负离子检测模式：离子源温度500 ℃; 气帘气241 kPa, CAD气48 kPa, 雾化器345 kPa, 加热器345 kPa; 喷雾电压4.5 kV; 质量扫描范围100~1 000 Da; 去簇电压80V, 去簇电压范围0; 碰撞能10 V, 碰撞能范围0; 累积时间0.25 s; 碰撞能10 V。

1.3.4 核磁共振条件

溶剂为氘代甲醇, 探头温度 300.0 K, 采用标准脉冲序列。

经GC-MS分析, 被查获的烟叶提取物中检出11.809 min处质荷比为145.0、171.1、213.1、269.1、301.1、357.2等离子碎片, 检索Mainlib、Replib、Wiley14、Nist17数据库未发现匹配成分, 根据碎片特征规律推断可能为新型合成大麻素衍生物, 总离子流图及质谱图见图1, 其质谱可能裂解途径见图2。

图1

Fig.1

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	图1 样品总离子流图及质谱图Fig.1 Total ion-flow chromatogram and mass spectrum of the analyte extracted from sample

图2

Fig.2

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	图2 样品气相质谱可能断裂途径Fig.2 Fragmentation pathway postulated with the GC-MS result of the analyte extracted from sample

采用1.3.2所述方法对1.2提取的纯化物进行红外光谱分析, 如图3所示。使用Spectrumv10.5.2软件进行谱图处理, 官能团吸收峰归属如表1所示。

图3

Fig.3

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	图3 样品红外光谱图Fig.3 Infrared spectrum of the analyte extracted from sample

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 样品红外光谱数据 Table 1 Infrared spectral data of the analyte extracted from sample 吸收峰/cm-1 强度 振动类型 化学键或基团 吸收峰/cm-1 强度 振动类型 化学键或基团 3413.50 W υ N-H N-H伸缩振动 1329.11 S δC-N 芳基C-N弯曲振动 2961.91 W υ C-H 苯环C-H伸缩振动 1215.10 M υ C-N 烷基C-N伸缩振动 1728.34 S υ C=O 甲酯C=O伸缩振动 1030.00 W υ C-O-C 甲酯C-O-C伸缩振动 1666.38 VS υ C=O 酰胺C=O伸缩振动 987.75 M δ=CH =CH面外弯曲振动 1521.47 VS δN-H N-H弯曲振动 909.96 M δ=CH2 =CH2面外弯曲振动 1490.52 S υ C=C 苯环C=C骨架伸缩振动 833.03 M δ-CH 芳氢面外弯曲与环骨架振动 1474.20 M υ C=C 苯环C=C骨架伸缩振动 787.48 M δ-CH 芳氢面外弯曲与环骨架振动 1439.21 M υ C=C 苯环C=C骨架伸缩振动 774.89 M δ-CH 芳氢面外弯曲与环骨架振动 1405.79 W δ-CH3 C-H弯曲振动 755.66 VS δ-CH2- CH2弯曲振动

表1 样品红外光谱数据 Table 1 Infrared spectral data of the analyte extracted from sample

样品高分辨质谱如图4, 其准分子离子峰为[M+H] 358.2209, 可能的碎片离子为：[M-C₂H₂O₂-H] 298.1984、[M-C₇H₁₂O₂+H] 230.1350和酰胺键断裂离子[M-C₇H₁₃NO₂-H] 213.1111、[M-C₁₂H₂₁NO₂-H] 145.0430, [M-C₁₅H₁₇N₃O₃-H] 69.0723、[M-C₈H₁₃NO₃-H] 185.1131、[M-C₉H₁₅NO₃-H] 171.0595、[M-C₁₂H₁₉NO₃-H] 131.0645。根据上述精确分子量, 可知其分子式为C₂₀H₂₇N₃O₃, 偏差-0.9 ppm。样品在不同碰撞能下的二级质谱如图所示, 其主要的碎片离子为m/z 145.0430, 其二级质谱可能裂解途径如图5所示。

图4

Fig.4

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	图4 样品高分辨质谱二级质谱Fig.4 High-resolution secondary mass spectrum of the analyte extracted from sample

图5

Fig.5

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	图5 样品的二级质谱可能断裂途径Fig.5 Fragmentation pathway postulated from secondary mass spectrum of the analyte

2.4.1 ¹H核磁共振谱(¹H-NMR)

经¹H-NMR分析, 可见14组峰。甲基CH₃：δ0.94、δ3.66 ppm单峰, 12个氢; 胺基NH：δ9.38 ppm单峰, 1个氢; 芳香环H：δ7.45、δ7.65、δ7.92、δ8.32 ppm多重峰, 4个氢; 碳碳双键H：δ4.88、δ5.13、δ5.82 ppm多重峰, 3个氢; 亚甲基CH₂：δ4.46、δ1.81和δ2.16 ppm, 多重峰, 6个氢; 次甲基CH：δ4.13 ppm单峰, 1个氢, 因立体结构效应和临近N和芳香基团的影响分裂。¹H-NMR数据归属见图6和表2所示。

图6

Fig.6

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	图6 样品的碳位命名图Fig.6 Carbon positioning into the structure of the analyte

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 样品1H-NMR数据 Table 2 1H-NMR data resulted from the tested analyte 化学位移δ/ppm 多重性 质子数 质子序号 化学位移δ/ppm 多重性 质子数 质子序号 0.94 单峰 9 4”-CH3、5”-CH3、6”-CH3 5.13 多重峰 1 5’ -C-H 1.81 多重峰 2 2’ -CH2 5.82 多重峰 1 4’ -C-H 2.16 多重峰 2 3’ -CH2 7.45 多重峰 1 5-CH 3.66 单峰 3 8”-CH3 7.65 多重峰 1 6-CH 4.13 单峰 1 2”-CH 7.92 多重峰 1 4-CH 4.46 多重峰 2 1’ -CH2 8.32 多重峰 1 7-CH 4.88 多重峰 1 5’ -C-H 9.38 单峰 1 NH

表2 样品1H-NMR数据 Table 2 1H-NMR data resulted from the tested analyte

2.4.2 ¹³C核磁共振谱（¹³C-NMR）

经¹³C-NMR分析, 可见18组峰：δ26.2、δ51.9 ppm为甲基碳信号; δ26.1、δ31.3、δ56.8 ppm为亚甲基碳信号; δ115.8、δ136.5 ppm为碳碳双键碳信号; δ35.9、δ120.5、δ139.7、δ142.2 ppm为季碳信号; δ160.7、δ171.5 ppm为羰基碳信号; δ66.0 ppm为次甲基碳信号; δ109.9、δ120.3、δ123.7、δ126.4 ppm为叔碳信号。¹³C-NMR数据归属见图6和表3所示。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 样品13C-NMR数据 Table 3 13C-NMR data resulted from the tested analyte 化学位移δ/ppm 碳类型 碳归属 化学位移δ/ppm 碳类型 碳归属 化学位移δ/ppm 碳类型 碳归属 26.1 仲碳 C-2’ 66.0 叔碳 C-2” 126.4 叔碳 C-6 26.2 伯碳 C-4”、C-5”、C-6” 109.9 叔碳 C-7 136.5 叔碳 C-4’ 31.3 仲碳 C-3’ 115.8 仲碳 C-5’ 139.7 季碳 C-9 35.9 季碳 C-3” 120.3 叔碳 C-4 142.2 季碳 C-3 51.9 伯碳 C-8” 120.5 季碳 C-8 160.7 季碳 C-10 56.8 仲碳 C-1’ 123.7 叔碳 C-5 171.5 季碳 C-1”

表3 样品13C-NMR数据 Table 3 13C-NMR data resulted from the tested analyte

样品红外光谱存在波数1728.34、1666.38、1521.49、1490.52、1217.08、987.75、909.96, 分别对应甲酯C=O伸缩振动、酰胺C=O伸缩振动、N-H弯曲振动、苯环C=C骨架伸缩振动、烷基C-N伸缩振动、=CH面外弯曲振动、=CH₂面外弯曲振动, 与MDMB-4en-PINACA的结构相符。样品高分辨质谱观察到准分子离子峰[M+H] 358.2209, 对应分子式为C₂₀H₂₇N₃O₃, 与理论值偏差-0.9 ppm。此外, [C₁₂H₂₂NO₂-H] 145.0430二级质谱信息也显示了酰胺键断裂碎片, 与MDMB-4en-PINACA的结构相符。样品¹H-NMR显示了氢信号, 由¹H-NMR核磁共振谱确定质子数为27, 并确定其质子归属; 样品¹³C-NMR显示了碳碳双键的碳信号、酰胺和甲酯的羰基碳信号的特征碳信号; 结合二级质谱和¹H-NMR、¹³C-NMR核磁共振谱的质子和碳原子归属验证了氢-氢或碳-氢信号的相关性, 均与MDMB-4en-PINACA的结构相符。通过与文献^{[8, 9, 10, 11]}比对和气相质谱、红外光谱、高分辨质谱和核磁共振谱分析, 可以确定样品为MDMB-4en-PINACA。