引用本文
杨钦雨, 陈漫纯, 赖小平, 邵万浚, 宁汉辉, 陈锐, 赵文勇, 邱升元. 484例硝酸破机法硅藻检验的法医学分析[J].刑事技术, 2021,46(4):414-417
YANG Qinyu, CHEN Manchun, LAI Xiaoping, SHAO Wanjun, NING Hanhui, CHEN Rui, ZHAO Wenyong, QIU Shengyuan. Forensic Statistical Analysis about 484 Cases of Diatom Examination through Digesting Organic Matter with Nitric Acid[J]. Forensic Science and Technology,2021,46(4): 414-417  
Doi: 10.16467/j.1008-3650.2021.0102
Permissions
Copyright©2021, 《刑事技术》编辑部
《刑事技术》编辑部
484例硝酸破机法硅藻检验的法医学分析
杨钦雨1, 陈漫纯1, 赖小平2,*, 邵万浚1, 宁汉辉1, 陈锐2, 赵文勇2, 邱升元2
1.广东医科大学基础医学院,广东 东莞 523808
2.广东医科大学基础医学院法医学系,广东 东莞 523808
* 通信作者简介:赖小平,男,广东河源人,博士,副教授,研究方向为法医病理学、法医临床学。E-mail: 109461327@qq.com

第一作者简介:杨钦雨,女,广东深圳人,本科在读。E-mail: 1515929420@qq.com

收稿日期: 2020-07-01 修回日期: 2020-08-09
基金资助: 广东医科大学大学生创新实验项目（ZYDB004）; 广东省大学生创新创业训练计划项目（201810571103）
摘要

目的 通过回顾性统计分析,探讨硝酸破机法硅藻检验需注意的问题。方法 收集2015~2020年受理的484例硅藻检验案件,利用硝酸破机法（GA/T-813-2008）对送检肺、肝、肾、骨髓及水样硅藻进行检验,并统计分析检验结果。结果 肺、肝、肾、骨髓硅135藻检出率分别为99藻检出率分别为99.16 %、75.52 %、73.96 %、50 %,其中肝和/或肾硅藻阳性的合计占89.08 %;肺外组织硅藻涂片检出硅藻数量绝大多数为1~10+个,其中约62.13 %肝及62.71 %肾组织检出1~5个硅藻/20g。结论 利用GA/T-813-2008方法进行硅藻检验时,肺外组织的硅藻检出数量普遍较少,在排除污染情况下若检出数个硅藻应视为阳性;应提取2个以上肺外器官组织进行硅藻检验以提高检出率,并严格实行复核制度避免假阴性。

关键词: 法医病理学; 溺死; 硅藻检验; 硝酸破机法
中图分类号:DF795.1 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2021)04-0414-04
Forensic Statistical Analysis about 484 Cases of Diatom Examination through Digesting Organic Matter with Nitric Acid
YANG Qinyu1, CHEN Manchun1, LAI Xiaoping2,*, SHAO Wanjun1,, NING Hanhui1, CHEN Rui2, ZHAO Wenyong2, QIU Shengyuan2
1. College of Basic Medicine, Guangdong Medical University, Dongguan 523808, Guangdong, China
2. Faculty of Forensic Medicine of College of Basic Medicine, Guangdong Medical University, Dongguan 523808, Guangdong, China
Abstract

Objective To explore with retrospective statistical analysis into the problems that should be paid of attention in diatom detection through digesting organic matter with nitric acid.Methods Evidential materials of 484 cases for diatom test received from 2015 to 2020 were collected, with their harboring diatom in lung, liver, kidney, bone marrow and the controlling water samples being examined by nitric acid method (GA/T-813-2008). The resultant data were statistically analyzed.Results There were respectively 99.16%, 75.52%, 73.96% and 50% detection rates of diatoms in lung, liver, kidney and bone marrow. The aggregate positive rate of diatoms in liver and/or kidney accounted for 89.08%. The majority of diatom observed under microscope from the slide of smearing extra-pulmonary tissue fell among 1~10plus, with about 62.13% hepatic or 62.71% renal tissues being detected of 1~5 diatoms/20g.Conclusion The number of diatoms detected from the extra-pulmonary tissue is generally less than expectation when GA/T-813-2008 method is the adoption. Positive should be admitted if several diatoms are detected without possibility of pollution, requesting that at least two extra-pulmonary tissues should be extracted for the diatom test to improve its detecting rate and that the double check verification had better be strictly implemented to avoid false negative.

Key words: forensic pathology; drowning; diatom detection; digesting organic matter with nitric acid

溺死是法医病理鉴定实践中常见死亡原因之一, 而硅藻检验是鉴别生前入水与死后入水的首选指标[1, 2], 尤其是水中高度腐败尸体, 骨髓硅藻检测是判断是否生前入水最好的方法。

本文对484例硝酸破机法硅藻检验案件进行回顾性统计分析, 进一步探讨硝酸破机法硅藻检验需注意的问题。

1 材料与方法
1.1 案例来源

2015~2019年广东医科大学司法鉴定中心受理的484例硅藻检验案例, 其中男性378例、女性106例, 男女比例为3.57:1; 年龄范围为0~68岁, 包括新生儿及婴儿3例。

1.2 硅藻检验方法

采用硝酸破机法（GA/T-813-2008）对送检组织（肺、肝、肾、骨髓）和水样进行强酸消化及多次离心处理后, 取沉淀液涂片, 20倍物镜下初筛硅藻, 在100倍油镜下进行硅藻确认及种属鉴别, 并对肝、肾组织进行硅藻定量。因在消化反应中可产生较多硅藻碎片, 肝、肾硅藻计数规则制定为:

1）硅藻面积大于50 %的计数为1个;

2）硅藻面积小于50 %, 且种属不同或种属相同但纹理大小不同的, 分别按1个硅藻计数;

3）硅藻面积小于50 %、种属相同且纹理形态大小一致的, 2个碎片计数为一个硅藻。

1.3 统计分析

利用Excel软件建立484例硅藻检验案件的数据检索库, 对尸体被发现月份、案发水域及其水样硅藻特点、送检组织（肺、肝、肾、骨髓）硅藻检出率及其检出硅藻数量等进行一般计数资料的回顾性统计分析。

2 结果
2.1 案发月份分布

484例硅藻检验案件的尸体发现时间（月份）从3月份开始逐月增多, 7月份达高峰, 8月份开始逐月回落（图1）。

图1 484例硅藻检验案件尸体发现时间分布Fig.1 Monthly distribution of the corpses found with the 484 cases of diatom test

2.2 案发水域及现场水样硅藻特点

484例硅藻检验案件中, 案发的水域包括江/河、水库/湖、海、池塘/鱼塘、水沟、游泳池等, 其中以江/河、水库/湖、海等自然水系最多（表1）, 另案发于游泳池4例, 水井2例。

表1 484例硅藻检验案件案发水域/场所 Table 1 The waters area where to find the 484 corpses

江/河、水库/湖、海、池塘/鱼塘、水沟等现场水样绝大部分检出数量及种属均丰富的硅藻, 常见淡水硅藻种属包括小环藻、菱形藻、羽纹藻、泥生藻、盘杆藻、舟形藻、桥弯藻、针杆藻、脆杆藻、圆筛藻、沟链藻、直链藻、异极藻等; 一例废弃跳水池水样硅藻数量丰富, 但种属较少（主要为曲丝藻、小环藻、桥弯藻、羽纹藻）, 两例游泳池水样仅检出数个脆杆藻、平丝藻、菱形藻、羽纹藻, 另一例游泳池未检出硅藻; 一例电梯井积水硅藻数量及种属也较少。珠江口近滩水样（如虎门）硅藻主要以淡水和咸淡水硅藻为主, 而来自惠州海岸的水样则为典型的咸水性硅藻, 常见种属包括圆筛藻、舟形藻、双壁藻、菱形藻、盘杆藻、曲壳藻、小环藻、双眉藻等, 以及海洋硅藻较具特征性的井字藻、骨条藻、盒形藻等。

2.3 送检器官组织硅藻检验结果

484例硅藻检验中, 有476例同时送检了肺、肝、肾组织, 其中11例同时送检了股骨; 另有1例仅送检肺、肾组织, 1例仅送检肺及股骨, 2例仅送检肝、肾, 4例仅送检股骨。各种检材中, 肺硅藻检出率最高（99.16 %）, 骨髓检出率最低（50 %）, 详见表2。

表2 484例硅藻检验各种检材的硅藻检验结果 Table 2 The test results of various samples from 484 cases

同时送检肺、肝、肾组织的476例中, 肺均检出数量不等（数个至大量）的硅藻, 肝、肾均检出硅藻或仅肝或肾检出硅藻的案件合计占89.08%（检出量多数为数个至十余个硅藻, 表3、4）; 在第一鉴定人认定肝、肾硅藻均阴性的64例案件中, 有12例经第二鉴定人或授权签字人复核检出硅藻。肝、肾硅藻均阴性的52例中, 有4例肺硅藻为阴性（在泳池、水沟及浴缸中发现尸体）, 12例肺仅检出数个硅藻（包括鱼塘中触电死亡及游泳池中死亡等案例）, 另有15例肺检出硅藻数量相对较少, 余21例肺硅藻数量丰富。

表3 同时送检肺、肝、肾组织的476例硅藻检出情况 Table 3 The diatoms detected from 476 cases of simultaneous delivery of lung, liver and kidney tissues
表4 肝、肾组织硅藻检出数量分布情况 Table 4 Distribution of the number of diatoms detected from liver and kidney
3 讨论

硅藻广泛分布于淡水、海水、盐泽中, 呈浮游或底栖状态, 不同水环境的硅藻群落及丰度有一定差异。珠江由八个大口门汇入大海, 形成一个形如喇叭的珠江口, 本研究显示该水域硅藻仍以淡水及部分咸淡水藻为主。

此外, 本组统计显示江/河、水库/湖、海、鱼塘等以及多数池塘的硅藻数量和种属均非常丰富, 但游泳池、部分小水沟等水源的硅藻数量及种属均相对较少甚至未检出, 相应尸体肺组织硅藻阴性或仅检出数个硅藻, 与既往文献报道较一致[3], 在此水域生前入水的, 其肝、肾硅藻亦可阴性。肺及肺外器官组织同时检出硅藻是判断生前入水的重要指标, 既往报道肺检出中等量以上硅藻, 同时肝或肾也检出硅藻的尸体可鉴定为生前入水[3]。

硝酸破机法（GA/T-813-2008）是2008年颁布的法医硅藻检验标准, 该方法具有操作简单、成本低、所需设备为实验室常规设备等优点。但该方法亦存在一些缺点, 如强酸试剂对环境及检验人员有危害、实验操作对技术人员经验要求较高等, 特别是该方法硅藻损失率高。

据报道, 按GA/T-813-2008方法离心并去上清一次硅藻损失约29.94%~49.6%, 特别是微小的硅藻易随上层液被丢弃[2]。本文统计结果显示每张肝、肾组织硅藻涂片多数仅检出1~10+个硅藻或硅藻小碎片, 其中约62 %的肝、肾硅藻涂片检出< 5个硅藻/20g（在肝、肾检出硅藻案件中分别约占82%、85%）, 与陈煌等报道较一致[3]。因此, 对于GA/T-813-2008方法, 在排除污染的情况下, 肝、肾、骨髓等肺外器官仅检出数个硅藻的亦应视为硅藻阳性。

由于涂片中硅藻数量极少, 在阅片过程中极易出现漏检而得出阴性结果, 因此, 对于肺外器官硅藻阴性的, 应严格执行第二鉴定人及授权签字人复核制度, 以排除假阴性的可能。建议在20倍物镜（40倍物镜在成像焦距下会沾染镜油）下初筛硅藻, 然后在油镜下进一步进行硅藻确认及种属鉴别, 这样可较好地避免10倍物镜下遗漏微小硅藻或硅藻碎片, 同时在油镜下能更清晰地观察硅藻形态特征, 有利于准确进行硅藻定性及种属鉴别。

此外, 统计结果显示肝、肾硅藻检出率较低, 骨髓检出率亦仅为50%, 但肝和/或肾硅藻阳性的比例合计可达89.08%, 因此提取2个或2个以上肺外器官组织可提高肺外器官硅藻检出率。有条件的可采用真空抽滤富集法以提高硅藻检出率[2, 4]。

本组52例肝、肾硅藻均阴性的案例中, 除31例是由于其他死因或溺水水样硅藻含量低外, 余21例肺硅藻数量丰富。

近年来, 有学者根据动物实验和实际案例提出肺组织与溺液硅藻含量的比值（CL/CD）是判断溺死的可靠指标, 这些研究主要是基于检测灵敏度高的微波消解-真空抽滤方法[5, 6], 而基于检测灵敏度较低的GA/T-813-2008方法的CL/CD值亦值得研究完善。

参考文献
[1] 郭景元. 法医鉴定实用全书[M]. 北京: 科学技术文献出版社, 2002: 292.
(GUO Jingyuan. A practical book of forensic medicine [M]. Beijing: Science and Technology Press, 2002: 292. ) [本文引用:1]
[2] ZHAO J, WANG Y Z, LIU C, et al. Detection of diatoms by a combination of membrane filtration and transparentness[J]. Journal of Forensic Sciences, 2016, 61(6): 1643-1646. [本文引用:3]
[3] 陈煌, 周安居. 498例水中尸体硅藻检验分析[J]. 中国法医学杂志, 2006, 21(S1): 23-24.
(CHEN Huang, ZHOU Anju. Analysis of diatom examination in 498 immersed cadavers[J]. Chinese Journal of Forensic Medicine, 2006, 21(S1): 23-24. ) [本文引用:3]
[4] ZHAO J, LIU C, BARDEESI A S A, et al. The diagnostic value of quantitative assessment of diatom test for drowning: an ana-lysis of 128 water-related death cases using microwave digestion-vacuum filtration-automated scanning electron microscopy[J]. Journal of Forensic Sciences, 2017, 62(6): 1638-1642. [本文引用:]
[5] 赵建, 罗银洲, 王玉仲, 等. 肺组织硅藻定量分析在实验动物溺死诊断中的应用[J]. 法医学杂志, 2019, 35(6): 706-709.
(ZHAO Jian, LUO Yinzhou, WANG Yuzhong, et al. Application of quantitative analysis of diatoms in lung tissue for the diagnosis of drowning of experimental animals[J]. Journal of Forensic Medicine, 2019, 35(6): 706-709. ) [本文引用:1]
[6] 李影, 陈轶群, 赖杰, 等. 溺死大鼠肺组织和水样中硅藻检验的定量对比研究[J]. 刑事技术, 2019, 44(4): 313-316.
(LI Ying, CHEN Yiqun, LAI Jie, et al. Quantitative comparison of diatoms in both the lungs of rats died from drowning and drowning media[J]. Forensic Science and Technology, 2019, 44(4): 313-316. ) [本文引用:1]