GC-MS联用仪, 配有自动进样器（日本Shimadzu公司）; 远红外辐射干燥箱（上海浦东跃欣科学仪器厂）。

草铵膦标准品由公安部物证鉴定中心提供, 用蒸馏水（屈臣氏）配制成1.0 mg/mL的储备液, 冷冻保存; 100 µ g/mL草铵膦工作液冷冻保存, 使用期1年。

所用有机溶剂均为分析纯, 购自国药集团化学试剂有限公司。

空白血为北京市红十字血站购买。

色谱柱:DB-5MS毛细色谱柱（30 m× 0.25 mm× 0.25 µ m）或其他等效柱; 升温程序:100 ℃保持1 min, 以10 ℃/min速率升温至280 ℃, 保持20 min; 进样口温度280 ℃; 载气为氦气, 流速为1.0 mL/min; 电子轰击能量70 eV, 传输线温度260 ℃, 离子源温度250 ℃; 扫描方式为全扫描（SCAN）, 扫描质量范围40~450 amu, 溶剂延迟3 min; 进样方式为分流进样, 分流比为10:1。

取空白血2 mL, 添加草铵膦标准品1 µ g, 涡旋混匀。用8 mL甲醇/乙腈（2:8, 体积比）振荡提取10 min或者超声3 min, 离心, 吸取上清液于80 ℃水浴挥干, 残渣用0.5 mL甲醇复溶置于具塞玻璃试管中, 加入0.5 mL乙酸酐^{[14, 15]}, 密封, 80 ℃干燥箱中衍生1 h。衍生产物于蒸发皿中80 ℃水浴挥干, 用0.2 mL乙腈定容, GC-MS分析。

草铵膦的乙酸酐衍生化GC-MS谱图见图2~3, 保留时间为12.905 min, 特征离子为m/z 56、150、192。

图2

Fig.2

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	图2 草铵膦乙酸酐衍生化/气相色谱-质谱法总离子流图Fig.2 TIC of glufosinate ammonium derivatized with acetic anhydride/propionic anhydride to undergo into GC/MS

图3

Fig.3

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	图3 草铵膦乙酸酐衍生化法质谱图Fig.3 MS of glufosinate ammonium derivatized with acetic anhydride/propionic anhydride to subject to GC/MS

根据草铵膦易溶于水的特点, 选择大极性的有机溶剂作为提取溶剂, 本文采用实验室常用提取溶剂甲醇/乙腈（2:8, 体积比）进行提取。

采用常规方法吡啶和乙酸酐法进行草铵膦的衍生化时, 未检出目标物, 因此本实验参考文献^[15], 并用实验室常备试剂乙酸酐代替文献中使用的丙酸酐, 用甲醇:乙酸酐（1:1）进行衍生化, 甲醇做溶媒, 结果证明完全可行。该衍生化方法需在无水条件下进行, 否则衍生化产率不高, 且衍生化产物还会分解, 影响检测结果, 所以提取液要挥干。实验采用酸酐为衍生化试剂, 为避免多余的酸酐损坏色谱柱, 所以衍生后要将衍生化试剂完全挥干后再用乙腈定容分析。关于溶媒、衍生化时间、衍生化方式选择见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 溶媒、衍生化时间、衍生化方式选择实验结果 Table 1 Selection of menstruum, time and mode for derivatization through experiment 样品 溶媒 衍生化方式 衍生化时间/h 衍生温度/℃ 结果 （m/z150的峰面积） 1 µ g 标准品 吡啶:乙酸酐（1:1） 水浴 4 80 未检出 吡啶:乙酸酐（1:2） 水浴/干燥箱 4 100 未检出 甲醇:乙酸酐（1:1） 水浴 4 80 24224 2 80 未检出 干燥箱 0.5 100 41220 1 100 38206 2 100 40147 3 100 41017 4 100 34216 200 ng 标准品 甲醇:乙酸酐（1:1） 干燥箱 1 100 6097 1 80 9317 1 mL血液中200 ng 标准品 甲醇:乙酸酐（1:1） 干燥箱 0.5 100 未检出 1 100 9240* 1 80 14322* 注:* 表示本实验低浓度时质谱图存在m/z 149的干扰, 需要扣除背景。

表1 溶媒、衍生化时间、衍生化方式选择实验结果 Table 1 Selection of menstruum, time and mode for derivatization through experiment

由表格可知, 参考文献^[15]中衍生化时间为4 h, 作者为节省时间衍生化2 h, 结果未检出目标物, 因此水浴衍生时仍采用文献上报道的时间4 h; 而使用干燥箱衍生化产率明显高于水浴衍生化的产率, 接近2倍关系, 故本实验采用干燥箱进行衍生化。

采用甲醇:乙酸酐（1:1）在干燥箱中100 ℃衍生, 衍生化时间为0.5、1、2、3 h时, 目标物特征离子峰面积值接近一致, 而衍生时间为4 h时, 目标物特征离子峰面积值下降近1/4。而血液添加标准品使用干燥箱衍生化, 时间选用0.5 h时未检出目标物, 而衍生化时间为1 h时检出目标物, 作者认为血液中的脂类物质干扰了衍生化产物的生成, 因此衍生化时间定为1 h。

使用干燥箱衍生化时, 血液添加样品和标准品衍生化实验结果均表明80 ℃衍生优于100 ℃衍生, GC-MS分析时衍生化产物受杂质干扰较少, 定量准确。

取空白血1 mL, 5份, 分别添加草铵膦标准品0.5、1.0、5.0、7.5、10.0 µ g, 按1.3操作, 以特征离子m/z 150的峰面积为纵坐标, 添加量为横坐标, 绘制工作曲线。

取空白血2 mL, 3份, 每份添加草铵膦标准品1.0 µ g, 按1.3操作, 以特征离子m/z 150的峰面积计算相对标准偏差RSD%, 数据见表2。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 血液中草铵膦的准确性测定（0.5 ug/mL, n=3） Table 2 Repeatability (accuracy) of glufosinate ammonium tested from whole blood, 0.5 ug/mL, n=3) 峰面积 平均峰面积 RSD% 样品1 样品2 样品3 235889 244102 229148 236379.6 3.2%

表2 血液中草铵膦的准确性测定（0.5 ug/mL, n=3） Table 2 Repeatability (accuracy) of glufosinate ammonium tested from whole blood, 0.5 ug/mL, n=3)

结果表明草铵膦在0.5 ~10 µ g/mL范围内线性良好, 工作曲线为y=324826x+30384, R²=0.997 5, RSD%(n=3)为3.2%, 满足刑事技术实验室的定量检验要求。

取空白血每份1 mL, 分别添加草铵膦标准0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 µ g, 按1.3操作。结果血液中草铵膦的最小检出限为0.2 µ g/mL, S/N=45:1。