近年有关氟硝西泮的相关检测报道主要涉及血浆^[14]、全血^{[15, 16]}和尿液^[17]中目标物的分析报道。由于氟硝西泮具有顺行性遗忘作用, 半衰期较短, 加之迷奸相关案件举报犯罪延迟等, 在部分案件中血液、尿液等生物样品中目标物已代谢消除, 经典的生物样品血液、尿液失去检测意义, 就此有实验室开发了基于毛发中氟硝西泮及其代谢物7-氨基氟硝西泮的检测分析方法^{[18, 19]}。也有研究者考虑到涉及案（事）件的饮料、酒水等物证中氟硝西泮的检测也可支持其他证据, 因此有人开展了饮料、酒水等饮品中氟硝西泮的检测及稳定性考察^{[20, 21]}, 结果显示氟硝西泮有降解, 因此在办理相关案件时应尽可能早收集、分析与案件有关的饮品物证, 同时应谨慎解释长期储存样本的定量结果。

涉及氟硝西泮检测分析的前处理研究中, 大多数采取液液萃取（LLE）、固相萃取（SPE）、液相微萃取（LPME）和沉淀蛋白等。液液萃取法有碱性条件下用苯-异戊醇(98.5:1.5)提取^[22]。固相萃取中有采用Oasis MCX柱萃取血浆中氟硝西泮及其代谢物, 该方法用甲醇和水进行柱活化、平衡; 上样后用0.1 N的盐酸和甲醇淋洗, 二氯甲烷/异丙醇/氨（78:20:2）洗脱, 有关氟硝西泮及其代谢物低、中、高三浓度的萃取回收率均大于90%^[3]。也有报道采用C18柱提取血浆、尿液中氟硝西泮及其代谢物, 用甲醇、水进行柱活化、平衡; 上样后, 水淋洗, 三氯甲烷洗脱。该方法在血浆、尿液中萃取回收率均大于83%^[23]。De Boeck等^[24]在碱性条件下对全血中包括氟硝西泮在内的苯二氮卓类药物进行分散液液微萃取, BMIMPF6离子液体作为萃取溶剂, 低、高浓度的氟硝西泮回收率分别为117.7%和124%。固相萃取技术是公认的标准, 但其缺点是劳动密集、耗时长; 分散液液微萃取快速、经济。Hasegawa等^[12]采用乙腈沉淀蛋白, 经QuEChERS方法净化, 提取胆汁、脂肪组织、肾组织等生物样品中氟硝西泮及其代谢物, 回收率在64.5%~104%之间。上述萃取模式通常是离线模式下进, Masaya等^[25]采用Monolithic SPE SpinTip在线模式方法分别萃取20 µ L血浆和100 µ L尿液中氟硝西泮及其代谢物, 血浆和尿液中的回收率分别为93.5%~118%、97.7%~109%, 该方法与LLE及传统固相萃取方法相比, 缩短了萃取时间, 减少溶剂消耗及减低柱萃取堵柱概率。

现有文献报道中, 有气相色谱-质谱联用（GC-MS）法^{[26, 27]}、毛细管电泳法^[28]、高效薄层色谱（HPTLC）法^[29]、高效液相色谱（HPLC）法^[23]、高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）法^{[30, 31]}或HPLC-MS/MS^{[12, 32]}及电化学分析法^[33]测定不同基质中氟硝西泮及其代谢物含量。GC-MS对氟硝西泮的检测和定量具有很高的敏感性和特异性, 主要缺点是代谢物分析前需要衍生化, 耗费时间^{[34, 35]}。与GC-MS相比, HPLC不需要衍生化即可同时分析氟硝西泮及其代谢产物, 但HPLC结合紫外检测器特异性差, HPLC-MS可增加其灵敏度, HPLC-MS/MS可进一步提高特异性, 增强信噪比。

Elian等^[35]利用GC-MS同时分析血液和血斑中氟硝西泮及其代谢物7-氨基氟硝西泮、N-去甲基氟硝西泮, 该方法先用五氟丙酸酐（PFPA）衍生化7-氨基氟硝西泮, 再用含有1%的叔丁基二甲基氯硅烷（TBDMSCI）的三氟乙酸铵（MTBSTFA）衍生化N-去甲基氟硝西泮, 并且二次衍生7-氨基氟硝西泮。该方法可改善色谱峰并且提高灵敏度, 1 mL血液的检测限为0.1 mg/dL。吴玉红^[29]采用HPTLC方法定性和半定量分析尿液中7-氨基氟硝西泮, 检测限为5 μ g/L, 测量限为15 μ g/L。Masaya等^[25]采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）法分析血浆和尿液中氟硝西泮和7-氨基氟硝西泮, 采用电喷雾电离, 正离子模式进行检测, 检出限在0.2~0.5 ng/mL, 总的色谱分析时间为5 min。Qin等^[13]采用液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱仪（LC-QE-HF-MS）检测到25种氟硝西泮代谢物, 该方法采用Hypersil gold C18柱, 流动相为水（含0.1% 甲酸）和乙腈（含0.1% 甲酸）, 梯度洗脱, 流速为0.3 mL/min, 色谱分析时长为8.5 min; 质谱采用电喷雾电离源, 全扫描和数据依赖性二级质谱扫描模式。Kollroser等^[14]利用高效液相色谱-大气压化学电离-串联质谱（HPLC-APCI-MS-MS）方法同时分析血浆中氟硝西泮及其主要代谢物7-氨基氟硝西泮、N-去甲基氟硝西泮, 该方法采用C18柱, 乙腈和0.1%的甲酸作为流动相, 梯度洗脱, 流速为0.6 mL/min, 氟硝西泮及其主要代谢物7-氨基氟硝西泮、N-去甲基氟硝西泮检出限分别为0.25、0.5和2.0 µ g/L。近期报道中^[33]有采用氧化铜复合多壁碳纳米管修饰电极检测血清、尿液和药物中氟硝西泮的方法, 并对电解液pH、扫描速率等实验条件进行优化测试, 在最佳条件下, 氟硝西泮在0.05~346.6 µ mol/L范围内呈线性关系, 最低检出限为14.3 nmol/L。