引用本文
任珊珊, 赵丹玭. GC/MS法测定四种安眠镇静类药物含量[J].刑事技术, 2020,45(5):545-547
REN Shanshan, ZHAO Danpin. Determination of Four Sedative-hypnotic Drugs with GC/MS for a Case of Abnormal Death[J]. Forensic Science and Technology,2020,45(5): 545-547  
Doi: 10.16467/j.1008-3650.2020.05.023
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《刑事技术》编辑部
GC/MS法测定四种安眠镇静类药物含量
任珊珊1,2, 赵丹玭1,3
1.迪安鉴定科学研究院,杭州 310007
2.吉林迪安司法鉴定中心,长春 130000
3.浙江迪安司法鉴定中心,杭州 310007

第一作者简介：任珊珊,女,山东郓城人,硕士,法医师,研究方向为法医毒物鉴定。E-mail: 1605654379@qq.com

摘要

目的 对1例非正常死亡案件心血检材进行毒物检测分析。方法 应用气相色谱-质谱法,以保留时间和特征离子碎片进行定性分析,并采用内标工作曲线法对4种目标物进行定量分析。结果 检出4种镇静催眠药物,分别为巴比妥、地西泮、氯丙嗪和异丙嗪,含量分别为2.04、0.06、0.05、0.28μg/mL。结论 本实验为法医判定死因和确定案件性质提供了参考资料,为以后类似案件判定提供思路。

关键词: 法医毒物学; 气相色谱/质谱; 镇静催眠药物; 法医鉴定
中图分类号:DF795.1 文献标志码:B 文章编号:1008-3650(2020)05-0545-03
Determination of Four Sedative-hypnotic Drugs with GC/MS for a Case of Abnormal Death
REN Shanshan1,2, ZHAO Danpin1,3
1. Dian Institute of Forensic Identification, Hangzhou 310007, China
2. Jilin-based Dian Forensic Center, Changchun 130000, China
3. Zhejiang Dian Forensic Center, Hangzhou 310007, China
Abstract

Objective To analyze the heart blood sample for a case of abnormal death.Methods The sampling blood was taken of 2mL and added with the internal standard substances, SKF525A and aprobarbital, afterwards subjected to first the acidic and consecutively the alkaline treatment with the respective extraction being followed, having the extractants combined for dryness and re-dissolved with methanol. The methanol-dissolved substances were detected with gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS), having been identified with their retention time and characteristic ion fragments. Quantitative analysis was carried out through the internal standard working curve.Results Four sedative-hypnotic drugs (barbital, diazepam, chlorpromazine and promethazine) were detected from the blood sample. The content of barbital, diazepam, chlorpromazine and promethazine was 2.04, 0.06, 0.05, 0.28μg/mL, respectively.Conclusions It is rare to have multiple sedative-hypnotic drugs tested out from just one blood sample although none of the four drugs had reached toxic or lethal concentration in the tested blood sample. Nevertheless, whether poisoning is attained or not is related to not only the amount of single one drug but also the taker's physique and the varieties of drugs dosed plus other factors. The discovery here may provide references for forensic examiners to deduce the death cause and truth of the involving case.

Key words: forensic toxicology; GC/MS; sedative-hypnotic drugs; forensic identification
1 案情简述

2018年6月22日2时许, 张某某（男, 52岁）在某焦化厂施工过程中晕倒, 后被送往医院救治, 经抢救无效死亡。法医进行尸体解剖及组织病理学检查发现死者生前患有大叶性肺炎（灰色肝变期）、慢性支气管炎、支气管周围炎、慢性脑膜炎、中~重度脑水肿等。为查明死因和确定案件性质, 要求对死者心血进行毒物检验分析。

2 实验部分
2.1 主要仪器与条件

2.1.1 主要仪器

GC/MS-QP2020气相色谱质谱联用仪（日本岛津公司）; XW-80A 旋涡混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）; HWS-24电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）; SC-4 低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）。

2.1.2 仪器条件

色谱条件：SH-Rxi-5Sil MS 毛细管柱（30 m× 0.25 mm× 0.25 µ m）; 柱温：100 ℃保持1.5 min, 以25 ℃/min程序升温至280 ℃保持15 min; 载气：氦气, 流速：1 mL/min; 进样体积1 μ L; 分流比：10∶ 1。

质谱条件：EI离子源; 电子轰击能量：70 eV; 进样口温度：280 ℃; 离子源温度：230 ℃; 扫描方式：SCAN; 质量扫描范围：40~500 amu; 溶剂延迟2.5 min。

2.2 标准物质与试剂

2.2.1 标准物质配制

氯丙嗪、异丙嗪标准品购自中国食品药品检定研究院; SKF525A标准品购自德国Merck Drugs。分别精密称取氯丙嗪、异丙嗪、SKF525A适量, 用甲醇配置成1.0 mg/mL的标准物质储备溶液, 密封, 置于冰箱中冷冻保存。用甲醇稀释上述标准物质储备溶液得到异丙嗪100 μ g/mL、氯丙嗪10 μ g/mL和SKF525A 200 μ g/mL的标准溶液, 密封, 置于冰箱中冷藏保存。

巴比妥标准物质溶液（1 mg/mL）、地西泮标准物质溶液（1 mg/mL）及烯丙异丙巴比妥标准物质溶液（1 mg/mL）均购自德国Merck Drugs。用甲醇稀释上述标准物质溶液得到巴比妥100 μ g/mL、地西泮10 μ g/mL和烯丙异丙巴比妥200 μ g/mL的标准溶液, 密封, 置于冰箱中冷藏保存。

2.2.2 其他试剂

甲醇、乙醚、氢氧化钠和盐酸均为分析纯, 去离子水。

2.3 检测方法

2.3.1 定性检测

取检材血和空白血各2 mL, 分别置于15 mL离心管内, 添加内标SKF525A和烯丙异丙巴比妥各2 μ g, 加入1 mol/mL HCl调节pH在3~4之间, 加入3 mL乙醚, 漩涡提取2 min, 离心（转速4000 r/min）3 min后取上清液置于试管中; 检材中再加入10%的NaOH溶液, 调节pH值大于11, 然后加入乙醚3 mL, 漩涡提取2 min, 离心（转速4000 r/min）3 min后取上清液, 合并乙醚提取液, 于60 ℃水浴挥干, 甲醇定容至100 μ L, 供GC/MS检验。

2.3.2 定量检测

1）工作曲线绘制：取空白血2 mL 6份, 均添加内标SKF525A和烯丙异丙巴比妥各10 μ L, 分别添加地西泮和氯丙嗪标准品溶液配制成浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 μ g/mL的样品; 再分别添加巴比妥和异丙嗪标准品溶液配制成浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 μ g/mL的样品, 按2.3.1方法处理检测, 以目标物和内标的峰面积比为纵坐标, 以目标物浓度为横坐标, 得到工作曲线, R² ≥ 0.992。

2）检材定量：准确吸取两份检材血, 各2 mL, 置于15 mL离心管内, 分别添加内标SKF525A和烯丙异丙巴比妥各10 μ L, 按2.3.1方法处理检测, 记录峰面积值, 计算含量。

3 结果
3.1 定性结果

检材血中检出色谱峰, 抽提离子后通过与标准品（巴比妥、地西泮、氯丙嗪和异丙嗪）物质的保留时间与质谱特征离子碎片及相对离子丰度比对, 结果一致, 空白血对照无干扰, 阳性结果可靠。（见图1~4, 表1）

图1 检材血中巴比妥色谱图（A）和质谱图（B）
Fig.1 Chromatogram (A) and mass spectrum (B) of barbiturate in the blood sample

图2 检材血中异丙嗪色谱图（A）和质谱图（B）
Fig.2 Chromatogram (A) and mass spectrum (B) of promethazine in the blood sample

图3 检材血中地西泮色谱图（A）和质谱图（B）
Fig.3 Chromatogram (A) and mass spectrum (B) of diazepam in the blood sample

图4 检材血中氯丙嗪色谱图（A）和质谱图（B）
Fig.4 Chromatogram (A) and mass spectrum (B) of chlorpromazine in the blood sample

表1 检材定性结果 Table 1 Qualitative results of the blood sample and the standards-spiked blood
3.2 定量结果

计算两份检材血中目标物及内标物的峰面积的平均值, 采用内标工作曲线法进行定量。结果检材血中巴比妥含量为2.04 μ g/mL, 地西泮含量为0.06 μ g/mL, 氯丙嗪含量为0.05 μ g/mL, 异丙嗪含量为0.28 μ g/mL。每份检材中目标物单独定量结果与两份检材取平均值定量结果相差不大, 无异常值。

4 讨论

法医毒物分析中, 安眠镇静类药物是主要对象之一, 文献报道和行业技术规范使用的检测方法主要为调节酸碱性后使用有机溶剂或固相萃取方法提取, 以气相色谱法、气质联用法、液相色谱法和液质联用法进行分析[1, 2, 3, 4, 5]。本文采用有机溶剂萃取和气质联用法对死者心血进行检测, 同时检出了三类四种安眠镇静药物成分。

本案例对死者心血中的毒（药）物进行检测, 同时检出巴比妥、地西泮、氯丙嗪及异丙嗪四种成分, 定量结果显示四种成分均在治疗剂量范围内, 提示死者生前服用过这四种药物。虽然死者心血中四种成分的浓度均未达到中毒及致死量浓度, 但毒物的量并不是影响中毒的唯一因素, 是否导致中毒, 还与摄毒者的个体情况及同时服用多种药物等因素有关, 具有较大的个体差异性, 一种毒物在人群中能够引起人体中毒死亡的剂量可在很大范围内变动。故该案应结合具体案情、病史及法医毒物、法医病理检验结果, 进行综合分析后做出死因判断。

参考文献
[1] 张炳谦, 王国强, 孙桂进, 等. GPC-GC/MS 法分析血中20种安眠镇静药物[J]. 中国法医学杂志, 2016, 28(4): 327-330.
(ZHANG Bingqian, WANG Guoqiang, SUN Guijin, et al. GPC-GC/MS analyzed 20 kinds of hypnotic sedative drug ingredients in blood[J]. Chinese Journal of Forensic Medicine, 2016, 28(4): 327-330. ) [本文引用:1]
[2] QIN X, HU B. Hollow fiber-liquid phase microextraction combined with gas chromatography for the determination of phenothiazine drugs in urine[J]. Journal of Chromatography B, 2010, 878(19): 1599-1604. [本文引用:1]
[3] MAURER H H. Position of chromatographic techniques in screening for detection of drugs or poisons in clinical and forensic toxicology and /or doping control[J]. Clinical Chemistry & Laboratory Medicine, 2004, 42: 1310-1324. [本文引用:1]
[4] 沈敏. 法医毒物司法鉴定实务[M]. 北京: 法律出版社, 2011: 91-95.
(SHEN Min. Practice of forensic identification of forensic poisons[M]. Beijing: Law Press, 2011: 91-95. ) [本文引用:1]
[5] 王朝虹, 张琳, 赵蒙, 等. 超高效液相色谱-质谱定量测定全血中的13种苯二氮卓类安眠镇静药物[J]. 刑事技术, 2016, 41(1): 46-49.
(WANG Zhaohong, ZHANG Lin, ZHAO Meng, et al. Simultaneous quantification of thirteen benzodiazepines and metabolites in whole blood by UPLC-MS/MS[J]. Forensic Science and Technology, 2016, 41(1): 46-49. ) [本文引用:1]