液-液萃取法的基本操作是在经过必要预处理的检材中加入与水不相混溶的有机溶剂, 使两相之间充分接触, 待两相间物质分配达到热力学平衡后分取有机相, 完成分离。由于抗凝血杀鼠剂在碱性条件下生成盐, 所以生物样品中抗凝血杀鼠剂的液液萃取一般需要将生物样品调成酸性。抗凝血杀鼠剂的液液萃取所用的萃取溶剂主要有乙酸乙酯、乙醚、乙腈、丙酮、氯仿、混合溶液以及非离子表面活性剂Triton X-114。

国内不同学者^{[2, 3, 4, 5, 6, 7, 8]}分别建立了用乙酸乙酯提取血液或尿液中抗凝血杀鼠剂, 用液相色谱或气相色谱进行分析的方法。试验结果表明, 乙酸乙酯进行血液或尿液中抗凝血杀鼠剂的提取效果良好。梁孟军等^[9]采用自制中性Al₂O₃ 净化小柱和乙酸乙酯反相提取净化法分别提取净化血和尿中的敌鼠。血样得到很好的净化, 尿样采用HCl和NaOH调pH后反提, 净化效果更好。敌鼠为弱酸性物质, 经调pH反提, 可以去除中性和碱性杂质, 但酸性杂质不能除去。Zhu等^[10]建立了头发中溴敌隆和大隆的LC/MS/MS检验方法。将头发从头皮处计算, 剪成1 cm长的小段。每份样品用去离子水和丙酮洗涤3次, 室温下晾干。将头发再剪成2~3 mm小段后, 用工具压成粉。处理好的头发样品与内标一起, 再经萃取提纯, 进行LC/MS/MS分析。该方法溴敌隆LOD为0.010 ng/mg, 大隆LOD为0.025 ng/mg。孟庆玉等^[11]采用浊点萃取方法分离纯化人尿中杀鼠灵、杀鼠醚、溴敌隆和溴鼠灵。赵海雨等^[12]在全血中加入邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液（pH 4）后, 用乙醚提取, 进行HPLC ESI MS/MS分析, 溴敌隆回收率为91.86 %。杨士云等^[13]以8 mL甲醇-乙腈（体积比为15:85）分2~3次提取2 mL血液中的溴敌隆, 涡旋振荡, 离心, 上清液过硅胶柱, 浓缩, 进行HPLC/MS分析。该法优点是在沉淀蛋白的同时提取出溴敌隆。陈坚等^[14]采用乙酸乙酯-乙醇（体积比为2:1）混合液提取血清中的敌鼠, 用GC-MS仪进行分析。王学虎等^[15]对含有杀鼠迷、杀鼠灵、溴敌隆和大隆4种鼠药的肝组织剪碎后匀浆化, 用pH4.5的盐酸加丙酮（体积比为2:8）溶液浸泡, 超声, 将离心后上清液挥干丙酮、过滤, 再用乙醚液液萃取并挥干乙醚, 续以甲醇-水（体积比为45:55）溶液溶解, 经0.45 µ m滤膜过滤, 采用高效液相色谱-电喷雾-质谱联用检测方法进行分析。蔡欣欣等^[16]建立了同时测定血浆中10种抗凝血类杀鼠剂的高效液相色谱方法。血浆样品用乙腈进行超声提取, 进行HPLC分析。Vindenes等^[17]采用LC-MS法检测全血中的溴敌隆。取全血450 µ L, 加入内标, 以乙腈萃取, 再经后续有关操作, 取乙腈层进行LC-MS分析。Fauconnet等^[18]采用丙酮-乙醚（体积比为9:1）的混合液提取5 g经匀质和无水硫酸钠干燥的含8种抗凝血杀鼠剂（包括敌鼠、氯敌鼠）的动物肝组织, 经离心, 再用丙酮-乙醚（体积比为5:5）的混合液提取、离心, 氮气干燥, 而后检测。Lomonaco等^[19]建立了HPLC测定人血中总华法林和未结合华法林及华法林醇的方法。以二氯甲烷-正己烷（体积比为1:5）的混合溶液萃取, 进行HPLC分析。为防止生物样品中基质影响太大, 有时要对提取液进行净化。液液萃取操作简单, 但是往往要用到大量的有机溶剂, 既会对环境造成污染, 也会危害操作人员的身体健康。

固相萃取法是上世纪70年代出现的一类分离方法, 适用于检材中难挥发的有机毒物和一部分易挥发有机毒物的分离。固相萃取技术在样品处理中的作用主要是净化和富集。生物样品中抗凝血杀鼠剂的固相萃取步骤一般为：生物样品经过去蛋白、用缓冲溶液调pH等处理后, 过活化后的固相萃取柱, 淋洗萃取柱去除部分杂质, 洗脱。生物样品中抗凝血杀鼠剂的固相萃取多采用C₁₈、SAX柱、硅胶柱、CN柱、MAX柱、GDX大孔树脂、HLB柱、Bond-Elut Certify II柱等作为萃取柱。不同的萃取柱萃取原理不同, 因此操作过程可能会有很大的差别。

蔡增轩等^[20]建立了生物样品中抗凝血类鼠药（杀鼠灵、杀鼠醚、溴敌隆、大隆、敌鼠、氯敌鼠）的检测方法。血样中加入甲醇, 混匀, 离心, 上清液加入NaOH溶液; 尿样中加入异丙醇和NaOH溶液, 混匀, 离心。上述处理液转移至活化过的MAX固相萃取柱, 依次用水、甲醇洗柱, 最后用2 %盐酸甲醇溶液洗脱, 供HPLC和HPLC-MS/MS分析。周淑光等^[21]以死者肝组织匀浆, 添加敌鼠钠盐并以HCl调节pH为2左右, 于常温下超声、离心分出上清液, 过刚处理好的C₁₈固相萃取柱, 然后用蒸馏水洗涤固相萃取柱至流出液澄清为止。吹干柱中残留的水分。分别用氯仿和丙酮洗提待测组分, 收集洗提液于干净的尖底试管中, 于空气流下40 ℃吹干, 用适量的流动相定量溶解残渣, 经过离心或者过Sep Pak滤柱后, 进行TLC和HPLC分析。封世珍等^[22]建立了固相萃取反相高效液相色谱分析全血及肝组织中的杀鼠灵、杀鼠迷、溴敌隆、大隆的方法。样品用pH 5~6的盐酸溶液处理后, 使用GDX-403固相柱萃取, 用乙酸乙酯洗脱。金米聪等^[23]建立了中毒应急检测样品生物体液内痕量敌鼠和氯敌鼠的高效液相色谱-离子阱质谱定性定量检测方法。全血样品由甲醇/乙腈（体积比为50/50, v/v）沉淀蛋白后再经Oasis HLB固相萃取小柱净化富集, 尿液样品直接经同类小柱净化富集。黄树梁^[24]建立了HLB柱固相萃取样品、HPLC法同时测定敌鼠、溴敌隆和溴鼠灵的新方法。样品经甲醇提取后, 再用HLB柱固相萃取、甲醇+0.3 %醋酸铵（体积比为95:5）洗脱, 以甲醇+0.3 %醋酸铵（体积比为75:25）为流动相, 经μ BondapaKC₁₈柱分离测定, 外标法定量。杨士云等^[25]用两种固相萃取技术（C₁₈柱和SILICA GEL柱）结合LC-MS方法, 对生物检材中的氯敌鼠进行了分离测定, 效果较好。血样中加入甲醇-乙醚-乙腈（体积比为1:1:8）, 振荡, 离心, 上清液过SILICA GEL柱, 流出液浓缩, 供测定。血样及肝脏样品调pH 6左右, 离心, 上清液C₁₈柱进行自动固相萃取, 用氯仿-丙酮（体积比为1:1）洗脱。经阴离子交换、氰基及硅胶柱固相萃取技术分离提取血、尿、肝及肾中的敌鼠^[26], 高效液相色谱法进行分析。用SAX柱萃取尿及血中的敌鼠的回收率均较高, 但用SAX柱萃取尿时萃取物中的杂质稍多。用CN柱萃取尿中的敌鼠, 萃取物中的杂质少, 回收率高, 但用其萃取血中的敌鼠, 回收率仅为10%左右。用乙腈沉淀蛋白法, 以SILICA GEL柱萃取血及肝脏中的敌鼠, 效果很好。黄克建等^[27]建立了同时测定全血和尿液样品中7种抗凝血杀鼠药的在线固相萃取/液相色谱-线性离子阱质谱（on-line SPE/LC-LIT/MS）的分析方法。用乙腈沉淀样品中的蛋白质, 经稀释、离心、过滤后直接进行液相色谱-线性离子阱质谱分析。与传统的离线固相萃取相比, 在线固相萃取具有速度快、成本低、能自动化分析等优点。刘国中等^[28]建立了固相萃取-气相色谱/质谱法（SPE-GC/MS）测定血液和尿液中溴敌隆的测定方法。血液、尿液经乙酸乙酯提取后, 过Oasis HLB固相萃取柱净化, 加乙酸乙酯定容, 用气相色谱-质谱法（GC/MS）进行测定。本法固相萃取的作用是作为液液萃取的一种净化方法。欧阳燕玲等^[29]建立了固相萃取-超高效液相色谱法同时测定血浆中8种抗凝血类杀鼠剂的方法。血浆经乙腈沉淀蛋白后, 上清液加入水及氢氧化钠溶液, 过经甲醇、水活化的MAX固相萃取柱, 分别用2 %氨水-甲醇、水淋洗萃取柱, 再以2 %甲酸甲醇溶液、2 %甲酸-乙酸乙酯溶液洗脱。洗脱液进行UPLC测定。Jason E. Schaff等^[30]建立了HPLC-HR-MS-MS法检测血液中抗凝血杀鼠剂的方法。血液样品沉淀蛋白后, 加入乙腈, 涡旋后离心。上清液50 ℃氮气吹干后, 用0.1M乙酸钠缓冲液（pH7）稀释。经用甲醇、含5 %甲醇的乙酸钠缓冲液（pH7）活化的Bond-Elut Certify II SPE柱提取, 依次用0.1 M乙酸钠缓冲液（pH7）、正己烷：乙酸乙酯（体积比为95:5）、甲醇：水（体积比为1:1）洗涤, 用正己烷：乙酸乙酯：乙酸（体积比为75:25:1）洗脱。吹干后用含0.06 %（体积分数）乙酸的甲醇溶液定容, 进行HPLC-HR-MS-MS分析。该方法经过了沉淀蛋白, 以及充分的净化, 提高了提取率, 降低了基质效应。与液液萃取法相比较, 固相萃取法具有操作简便快速、提取率高、萃取液干净、成本低、易于自动化等优点, 缺点在于批次间的重复性难保证。

对抗凝血杀鼠剂的色谱法分析萃取技术, 建立净化效果好、污染少、灵敏性高、专属性强、分离效率高、检测成本低、操作简单快捷的萃取方法, 是今后的发展方向。例如, 若能用离子交换树脂直接将样品中的抗凝血杀鼠剂交换至树脂上, 然后用小体积溶剂洗脱并提取离子交换树脂上的抗凝血杀鼠剂, 把洗脱、提取、富集三种作用融汇到一起, 提取液不需浓缩即可直接进行LC/MS/MS和HPLC分析。若该种萃取方法再使用廉价易得的国产离子交换树脂做萃取剂, 那将更适合于公安部门应用。