引用本文
涂国章, 张显强, 先德鑫. 酒驾乙醇检测血液样本保存时效研究[J].刑事技术, 2017,42(6):460-462
TU Guozhang, ZHANG Xianqiang, XIAN Dexin. Preservation Chronergy of Blood Samples from Drunk Drivers[J]. Forensic Science and Technology,2017,42(6): 460-462  
doi: 10.16467/j.1008-3650.2017.06.006
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《刑事技术》编辑部
酒驾乙醇检测血液样本保存时效研究
涂国章1, 张显强1,2,*, 先德鑫3
1.贵州警官职业学院,贵阳 550005
2.贵州省道路交通事故鉴定工程技术研究中心,贵阳 550005
3.贵州省开阳县公安局,贵州 开阳 550300
* 通讯作者：张显强（1978—）,男,贵州台江人,博士,教授,研究方向为微量物证、毒物毒品。E-mail:zhangxianqiang@126.com

第一作者简介：涂国章（1970—）,男,贵州德江人,学士,副教授,研究方向为微量物证、毒物毒品。E-mail:1462347704@qq.com

摘要

目的 探讨酒驾血液样本有效保存时间,防止无效检验,确保血液中乙醇含量测定结果准确。方法 选取EDTA-K2管、枸橼酸钠(1:9)管、肝素钠管等三种真空抗凝管存储静脉血,于- 20℃冷冻,采用气相色谱（GC）法测定0、3、7、14、21、30、42、49d的血液中乙醇含量并进行初筛。然后选取血液乙醇含量测定结果稳定性较好的管为储血容器,于-20℃冷冻存储静脉血,GC法测定0、3、7、14、21、30、60、90、120、150和180d的血液中乙醇含量。结果 血液中乙醇含量稳定性较好的管为EDTA-K2管,枸橼酸钠(1:9)管和肝素钠管在42d后乙醇含量有明显变化。EDTA-K2管在90d以内乙醇含量稳定性好,变化量很小,90d后含量呈显著下降的趋势。结论 酒驾血液样本保存时效为90d,超出90d后,随着时间延长血液中乙醇含量检测结果与最初检测值相比将出现较大偏差。

关键词: 真空抗凝采血管; 乙醇含量; 血液样本; 保存时效
中图分类号:DF795.1 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2017)06-0460-03
Preservation Chronergy of Blood Samples from Drunk Drivers
TU Guozhang1, ZHANG Xianqiang1,2,*, XIAN Dexin3
1. Guizhou Police Officer Vocational College, Guiyang 550005, China
2. Guizhou Provincial Engineering Research Center for Verification of Traffic Accidents Responsibility, Guiyang 550005, China
3. Kaiyang Public Security Bureau, Kaiyang 550300, Guizhou, China
Abstract

Objective To explore the effective preservation time for drunk driver’s blood to receive valid detection so as to ensure the accuracy of alcohol concentration determined.Methods Three kinds of vacuum anti-coagulative blood samples, kept respectively in the tube of EDTA-K2, sodium citrate (1:9) and sodium heparin, were selected to preserve under -20℃. Alcohol concentration of the blood samples was detected with gas chromatography (GC) on the day of 0, 3, 7, 14, 21, 28, 42 and 49 for primary screening. Into the tube showing the best stability of alcohol content was stored the venous blood at -20℃. GC was once again used to determine the alcohol concentration of the stored blood at the day of 0, 3, 7, 14, 21, 30, 60, 90, 120, 150 and 180.Results The EDTA-K2 tube showed of the best stability of blood alcohol concentration while both the sodium citrate (1:9) and sodium heparin tube made the alcohol content changed obviously after 42 days. In the EDTA-K2 tube, the alcohol kept its concentration steadily within 90 days, yet then being significantly continuous decreasing.Conclusions The preservation chronergy is within 90 days for the drunk driver’s blood sample to be kept with EDTA-K2 tube.

Key words: vacuum anti-coagulative blood tube; alcohol concentration; blood; preservation chronergy

酒精摄入对驾驶人员的注意力、判断力、控制力以及应急能力均可能产生影响, 酒后驾驶是导致交通事故的重要危险因素之一[1, 2]。酒驾行为认定依赖于血液中乙醇含量的准确测试[3], 而该含量的准确性受采血方法、储存条件、保存时间等因素的影响。为了减小血液中乙醇含量测试结果与实际浓度的偏差, 提高测试结果的准确度, 需要对上述影响因素进行更好的选择和控制。以往研究显示, 对采血方法、储存条件的研究较多且已有比较明确的结论[4, 5, 6, 7]。但对于酒驾行为发生后, 自采血到检验的有效保存时间（有效保存时间即保存时效）的探讨目前尚无定论, 而且基层交管部门查处嫌疑酒驾行为后, 由于受到种种主客观条件（如未能及时采血、采血后未及时送检或送检后检验鉴定机构未及时检验等）的影响, 检材可能会失去检验条件, 而无效检验不仅造成人力、财力的浪费, 还可能导致检验结论错误, 产生严重后果。因此, 探讨酒驾血液样本的保存时效很有必要。研究保存时间对血液乙醇检测结果的影响, 对于科学保存检材血液、把握有效检验时间、对酒驾行为进行准确认定具有重要的意义。

1 材料与方法
1.1 样本来源

选择健康成年男性30人, 在酒后30 min后至实验室抽取静脉血2 mL各10管[8]。血样分别储存于EDTA-K2管、枸橼酸钠（1:9）管、肝素钠管等三种真空抗凝采血管中, 立即测量各管中血液的乙醇含量, 选取其中乙醇浓度≥ 20 mg/100 mL且含量数值接近的30份血样为研究样本（三种真空抗凝采血管各10份, 分别依次标记为1~10号）, 在冰柜(-20℃)中保存并进行初筛, 分别在0、3、7、14、21、30、42、49 d测定血液中乙醇含量。根据初筛结果, 选择血液中乙醇含量稳定性较好的采血管, 在-20℃下冷冻存储, 分别在0、3、7、14、21、30、60、90、120、150和180 d测定血液中乙醇含量, 以初始乙醇浓度≥ 20 mg/100 mL且含量数值接近的10份血样为研究样本探讨酒驾血液保存时效。

1.2 仪器与材料

岛津GC-2010 plus型气相色谱仪、岛津HS-20型顶空自动进样器。

乙醇标准品和叔丁醇标准品均由上海安谱科学仪器有限公司提供, 乙醇标准品浓度为100 mg/100 mL, 叔丁醇内标液浓度为40 μ g/mL。EDTA-K2管、枸橼酸钠（1:9）管、肝素钠管等真空抗凝采血管均采用江西南昌赣达医疗器械有限公司生产的一次性真空储血管。

1.3 色谱条件

色谱条件：色谱柱为Rtx-BAC1（30 m× 0.32 mm）毛细柱, 柱温40 ℃; 载气为氮气（纯度≥ 99.999%）, 流速8 mL/min; 进样口温度150 ℃; 柱流量5 mL/min, 吹扫流量3 mL/min, 分流比6.4:1; 检测器为氢火焰离子化检测器（FID）, 温度250 ℃。顶空进样：恒温炉温度65 ℃, 样品流路温度105 ℃, 传输线温度110 ℃, 样品瓶恒温时间10 min, 样品瓶加压时间0.3 min, 加压平衡时间0.3 min, 导入时间0.8 min, 导入平衡时间0.4 min, 进样时间0.5 min, 进样针冲洗时间0.4 min。

1.4 实验方法

按中华人民共和国公共安全行业标准《生物样品血液中乙醇的顶空气相色谱检验方法》（GA/T 1073-2013）进行检验。采用内标曲线法进行定量测定, 标准曲线方程为：y = 0.0574386 x - 0.0266151, y 为乙醇与叔丁醇的峰面积比值, x 为乙醇工作溶液浓度（mg/100 mL）。对同一份血样进行平行试验, 结果取均值, 且双样相差应小于等于5%。

1.5 统计学分析

应用SPSS 20.0 进行重复测量数据的方差分析和单因素方差分析, 采用Duncan氏新复极差法比较不同处理间的差异显著性。检测水准α ≈ 0.05[9]。

2 结果
2.1 -20℃保存条件下三种采血管中血液乙醇含量在各测试时间段的比较

2.1.1 三种采血管血液乙醇含量的比较

三种采血管的血液乙醇含量差异有统计学意义（F =221.051, P < 0.01）。三种管的血液乙醇含量见表1。

表1 三种采血管间血液乙醇含量比较 Table 1 Comparison of blood alcohol concentration in three kinds of blood collecting tubes (n=10, $bar{x}$± s, mg/100mL)

2.1.2 三种采血管血液乙醇含量随时间变化的趋势

图1显示：枸橼酸钠（1:9）管(S)、肝素钠管(R)在35 d后血液乙醇含量检测结果有明显变化, 而EDTA-K2管(Z)在49 d内仍然保持结果稳定。可见, 这三种真空抗凝采血管中EDTA-K2管血液乙醇含量结果稳定性更好, 血液保存时效相对更长, 更适宜做酒驾血液样本的存储容器。

图1 3种采血管中血液乙醇含量随时间变化的趋势图Fig.1 Blood alcohol concentration varying with time in three kinds of blood collecting tubes

2.2 -20℃保存条件下EDTA-K2管中血液乙醇含量在各测试时间段的比较

2.2.1 不同时间段血液乙醇含量的比较

就血液乙醇含量结果稳定性较好的EDTA-K2管进行不同时间段血液乙醇含量比较。结果显示：血液乙醇含量随时间的变化有统计学意义（F =275.044, P < 0.01）。通过单因素方差分析可知：在90 d内血液乙醇含量变化不大, 稳定性好, 而90 d以后血液乙醇含量变化较大。

2.2.2 血液乙醇含量随时间变化趋势

EDTA-K2管中血液样本在不同时间测试的乙醇含量变化趋势如图2显示：在0~90 d之内血液乙醇含量随时间变化不大, 在90 d之后血液乙醇含量随时间发生了较大的变化, 120 d之后变化更加显著。

图2 不同时间段EDTA-K2管中血液乙醇含量变化的趋势图Fig.2 Blood alcohol concentration changing along with time in EDTA-K2 blood collecting tube

3 讨论

血液中乙醇含量的检测结果是判定酒后驾驶行为的重要依据。以往研究发现保存时间对血液乙醇含量检测有影响[10, 11, 12]。采集嫌疑酒驾人员血液后血液样品何时送检以及送检后何时检验在相关行业标准中并没有严格规定, 文献报道的研究工作也没有明确的结论（有的提到在4h内尽快测定, 有的笼统地说及时测定等[10, 11, 12]）, 实践中血液样品保存时间不规范统一, 有保存3个月、6个月不等, 更长的保存了3年多。然而酒驾血液乙醇含量检测中血液采集后保存时效究竟是多久呢?根据血液自身变化规律和血液中乙醇的存在形式, 保存时间越短越接近真实值。不过, 笔者认为只要采用合适的存储容器和保存条件, 血液不变质、不发酵、不凝固、不衰变, 乙醇不挥发, 血液成分之间及血液成分与乙醇之间不发生反应, 不导致乙醇增减, 那么乙醇含量的测定结果都是有效的。基于此, 本研究筛选EDTA-K2管为储血容器, 采血后于-20 ℃保存, 进行酒驾血液样品保存时效的研究。结果显示：90 d以内血液中乙醇含量测试结果与最初的结果接近, 90 d以后测试结果与最初结果有较大偏差。

综上所述：本研究证实保存时间对于血液乙醇含量检测结果有重要影响。建议交警部门在采集涉嫌酒驾人员血液后, 使用EDTA-K2真空抗凝采血管储存, 并于-20 ℃保存条件下90 d内检验, 以保证血液中乙醇含量测试结果的准确性。

The authors have declared that no competing interests exist.

作者已声明无竞争性利益关系。

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