引用本文
刘洪敏, 黄垒, 廖炫栋, 赵文嵩, 李树华, 李绍鹏, 方平, 刘青青, 刘帅, 李虹. UPLC-MS/MS法检测氯麻黄碱[J].刑事技术, 2017,42(5):392-394
LIU Hongmin, HUANG Lei, LIAO Xuandong, ZHAO Wensong, LI Shuhua, LI Shaopeng, FANG Ping, LIU Qingqing, LIU Shuai, LI Hong. Determination of Chloroephedrine by UPLC-MS/MS[J]. Forensic Science and Technology,2017,42(5): 392-394  
doi: 10.16467/j.1008-3650.2017.05.012
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UPLC-MS/MS法检测氯麻黄碱
刘洪敏1, 黄垒2, 廖炫栋3, 赵文嵩3, 李树华1, 李绍鹏4, 方平3, 刘青青1, 刘帅1, 李虹3,*
1.昆明医科大学法医学院,昆明 650500
2.普洱市公安局,云南 普洱 665000
3.毒品分析及禁毒技术公安部重点实验室,昆明 650228
4.玉溪市公安局,云南 玉溪 653100
* 通讯作者：李虹（1963—）,女,云南个旧人,学士,主任法医师,研究方向为毒物毒品分析。E-mail:yngalh@163.com

第一作者简介：刘洪敏（1988—）,女,河南永城人,硕士研究生,研究方向为法医毒物分析。E-mail: hongminqq123.com@qq.com

摘要

目的 采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术建立检测氯麻黄碱的方法。方法 以流动相为乙腈-甲酸(0.3%)水溶液进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子（ESI+）多反应监测（MRM）模式进行质谱分析,以质荷比为184.2/148.2、184.2/91.2和184.2/133.2三对特征离子对和保留时间对氯麻黄碱进行定性分析,用外标标准曲线法对氯麻黄碱进行定量分析。对氯麻黄碱在9种常见提取溶剂中的溶解性进行比较,确定氯仿为最佳提取溶剂。结果 氯麻黄碱在1~100ng/mL线性范围内,线性方程： A = 45000× C + 49700,线性关系良好（ R2=0.9993）,检出限和定量限分别为0.01ng/mL和0.04ng/mL;精密度小于10%,准确度大于90%。结论 本文建立的氯麻黄碱的UPLC-MS/MS检测方法具有操作简便、灵敏度高、准确度好的优点。

关键词: 氯麻黄碱; UPLC-MS/MS; 检测方法
中图分类号:DF795.1 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2017)05-0392-03
Determination of Chloroephedrine by UPLC-MS/MS
LIU Hongmin1, HUANG Lei2, LIAO Xuandong3, ZHAO Wensong3, LI Shuhua1, LI Shaopeng4, FANG Ping3, LIU Qingqing1, LIU Shuai1, LI Hong3,*
1. College of Forensic Medicine, Kunming Medical University, Kunming 650500, China
2. Puer Municipal Public Security Bureau, Puer 665000, Yunnan, China
3. Key Laboratory of Narcotics Assay and Control Technology, Ministry of Public Security, Kunming 650228, China
4. Yuxi Municipal Public Security Bureau, Yuxi 653100, Yunnan, China
Abstract

Objective To detect the chloroephedrine by ultra-performance liquid chromatography in tandem with mass spectrum (UPLC-MS/MS).Methods UPLC-MS/MS was conducted with the mobile phase that was consisted of acetonitrile and 0.3% formic acid in water, running in gradient elution, along with mass spectrometric acquisition being carried out by electrospray ionization in positive mode (ESI+) plus multiple reaction monitoring (MRM). Multiple characteristic ion pairs (184.2/148.2, 184.2/91.2 and 184.2/133.2) and retention time were adopted to chloroephedrine for qualitative analysis, and the external standard method was used for quantitative analysis. In comparison of the solubility and stability of chloroephedrine in 9 kinds of common extraction solvents, the chloroform was shown the best.Results For chloroephedrine, its linear range was 1~100 ng/mL, linear equation: A = 45000×C + 49700, and the linear relationship being well with the correlation coefficient as 0.9993, the qualitative and quantitative restriction showing 0.01 ng/mL and 0.04 ng/mL, respectively. The precision was less than 10% and the accuracy higher than 90%.Conclusion This method is of higher sensitivity and good accuracy for chloroephedrine detection, with chloroform the best solvent.

Key words: chloroephedrine; UPLC-MS/MS; detection

氯麻黄碱, 学名为（1s, 2s）-β -氯代甲基苯丙胺, 是制造毒品甲基苯丙胺的重要中间反应产物。由于氯麻黄碱理化性质活泼, 在高温下易转化生成1, 2-二甲基-3-苯基-氮丙啶（简称二甲基苯基氮丙啶）, 目前国内外对氯麻黄碱的检测研究较少, 一般用气相色谱质谱联用法对其进行检测分析, 只能检出二甲基苯基氮丙啶[1, 2]。在国内, 李航麒等分别应用红外光谱法、GC/MS及超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱仪对氯麻黄碱进行定性分析研究[3]。

本研究应用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）对氯麻黄碱进行定性、定量分析, 并对氯麻黄碱在氯仿、甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、正丙醇、异丙醇、叔丁醇和正丁醇等9种常见有机溶剂中的溶解度进行了比较, 确定氯仿为最佳提取溶剂。本研究建立的检测方法操作简便, 结果准确可靠, 能为公安司法机关等部门打击毒品犯罪及同行检测研究提供借鉴。

1 材料与方法
1.1 仪器

超高效液相色谱-串联质谱联用仪（UPLC-MS/MS）：Agilent1290型超高效液相色谱仪, AB SCIEX 4000 Q TRAP 串联质谱仪。

1.2 标准品与试剂

（1s, 2s）-β -氯代甲基苯丙胺盐酸盐由公安部禁毒局国家毒品实验室提供, 纯度为（99.5± 0.5） %; 乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇试剂为色谱纯, 正丙醇、正丁醇、叔丁醇、丙酮、氯仿、甲酸、氨水试剂为分析纯, 实验用水为去离子水。

1.3 实验样品

案件现场缴获的“ 氯麻黄碱” 样品。

1.4 色谱条件

ACQUITY UPLC® BEH C18色谱柱(2.1 mm× 50 mm, 1.7 μ m); 流动相甲酸（0.3 %）水溶液-乙腈梯度洗脱, 洗脱程序见表1; 进样体积：5 μ L, 流速：0.4 mL/min, 运行时间为6.0 min, 柱温35℃。

表1 流动相的洗脱程序 Table 1 Elution set-up for mobile phases
1.5 质谱条件

电喷雾离子源采用正离子扫描, 多反应监测（MRM）, 三重四极杆检测器; 毛细管电压为5.5kV; 离子源温度：300源温; 去溶剂温度：550℃, 去溶剂气流量：800 L/h; 锥孔气流量：150 L/h; 碰撞气流量：0.15 mL/min。氯麻黄碱的监测离子及锥孔电压、碰撞电压等参数见表2。

表2 氯麻黄碱的监测离子、锥孔电压及碰撞能 Table 2 Monitor ion, cone voltage and collision energy for chloroephedrine detection
1.6 标准工作液的配制

精密称量14.73 mg氯麻黄碱盐酸盐标准品于10 mL容量瓶内, 用氯仿稀释至刻度线, 振摇均匀后得到1.0 mg/mL氯麻黄碱标准液, 置4 ℃冰箱保存。并用氯仿配制浓度分别为5.0、50.0、100.0 ng/mL的标准溶液。

2 结果
2.1 系统适应性试验

在1.4和1.5分析条件下, 分别对氯麻黄碱标准品（10.0 ng/mL）和“ 冰毒” 样品进行检测, 以184.2/148.2、184.2/91.2和184.2/133.2三对离子对和保留时间（Rt=2.03min）进行定性分析; 并与已知氯麻黄碱标准物质进行比对, 空白对照无干扰。实验结果表明UPLC-MS/MS检测方法专属性好（图1）。

图1 不同样品中氯麻黄碱的MRM色谱图（上：氯麻黄碱标准品; 下：“ 冰毒” 样品）Fig.1 MRM chromatograms of chloroephedrine from different samples

2.2 提取溶剂的考察

分别对氯仿、乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、正丙醇、异丙醇、正丁醇和叔丁醇等9种提取溶剂进行了比较分析。图2显示氯麻黄碱在9种不同溶剂中不同时刻的响应度及含量变化。分析可知, 氯麻黄碱在氯仿中的响应度最高, 稳定性较好, 故选用氯仿作为提取溶剂。

图2 氯麻黄碱在不同溶剂中不同时刻的响应度Fig.2 The responsivities of chloroephedrine in different solvents at different times

2.3 线性范围、检出限和定量限

取浓度分别为1.0、5.0、10.0、20.0、50.0和100.0 ng/mL的线性工作溶液, 在1.4和1.5节条件下测定; 以定量离子（184.2/148.2）峰面积A为纵坐标, 质量浓度C为横坐标作图(见图3), 求得标准曲线的回归方程和相关系数（R2）。检出限（LOD）以信噪比（S/N）大于3为评价标准, 定量限（LOQ）以信噪比大于10为标准, 以线性最低点溶液逐倍稀释后, 求得检出限。氯麻黄碱的线性方程、定性限和定量限见表3。

图3 氯麻黄碱在线性范围1~100ng/mL内的线性图Fig.3 The linear graph of chloroephedrine in the range of 1~100ng/mL

表3 氯麻黄碱的线性方程、定性限和定量限 Table 3 The regression equation, linear range, detection and quantitative limit of chloroephedrine
2.4 准确度和精密度

用氯仿配制低、中、高三个浓度的标准品溶液, 在1.4和1.5节条件下直接进样测定, 计算准确度和精密度, 结果见表4。结果表明UPLC-MS/MS对氯麻黄碱检测准确度高, 仪器的检测稳定性良好。

表4 氯麻黄碱的准确度、精密度 Table 4 Results of accuracy and precision for chloroephedrine detection
2.5 实际样品检测

现场缴获样品, 研磨至粉末状后, 精密称取10.0mg, 用氯仿稀释一定倍数后, 在1.4和1.5节条件下测定, 样品中定性检出氯麻黄碱, 表明该检测方法适用性良好。

3 讨论

本文利用UPLC-MS/MS检测技术对氯麻黄碱定性定量分析进行了研究, 并进行了氯仿、甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、正丙醇、异丙醇、正丁醇和叔丁醇等9种常见有机溶剂溶解度的比较, 结果表明, 氯麻黄碱在氯仿中溶解度好, 检测响应度最高, 确定氯仿作为检测氯麻黄碱的最佳提取溶剂。该方法操作方便, 灵敏度高, 准确度和精密度好, 为当前制毒案件中查获氯麻黄碱的定性定量检验鉴定提供了一套行之有效的方法。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 张新威. 中国刑事科学技术: 毒品和毒物检验[M]. 北京: 中国人民公安大学出版社, 2003: 533-534. [本文引用:1]
[2] 张琳, 张福成, 王朝虹, 等. 固相萃取-超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时检测尿液中的麻黄碱和N-甲基麻黄碱[J]. 色谱, 2013, 31(9): 898-902. [本文引用:1]
[3] 李航麒, 兰晖, 庄顺, 等. 氯麻黄碱的检测研究[J]. 刑事技术, 2015, 40(6): 477-479. [本文引用:1]