钴绿JF-B5003（湖南巨发科技有限公司）; 甲醇、无水乙醇、二甲基甲酰胺、氯仿、丙酮、十二烷基硫酸钠（SDS）均为分析纯（重庆川东化工（集团）有限公司）; 月桂酰胺丙基二甲胺（PKO）、苯扎溴铵（1227）、十二烷基三甲基氯化铵(DTAC)、椰油酰胺丙基氧化胺（CAO-30）、十二烷基羟磺基丙基甜菜碱（DLHS）均为化学纯（上海德俊化工科技有限公司）。

气压式喷壶, 胶头滴管, 水银温度计; VSC-5000型文检仪（Foster+Freeman, 英国）。

分别以玻璃、瓷砖、塑料片、铝合金、白色人造皮革、透明胶带（粘面）、A4复印纸等七种常见客体为载体制作实验样本。制作时, 首先用棉签将新鲜人血均匀涂抹于手指, 再用手指分别在各类客体上连续按捺, 留下血液浓度由深到浅的成串新鲜血手印, 并将其中部分较微弱血手印保存用于研究显现试剂对新鲜血痕与陈旧血痕的显现效果。

预试验表明, 钴绿粉末不溶于常温蒸馏水, 但经加热到45 ℃时可在水中均匀分散; 而加入适量表面活性剂后, 钴绿小颗粒能在常温水中均匀分散且不沉淀、分层。

配制方法：以配制100 mL显现试剂为例, 分别计算所需钴绿及表面活性剂的用量, 先将适量的表面活性剂溶解于50 mL选取的溶剂中, 搅拌至表面活性剂完全溶解后, 再加入适量的钴绿JF-B5003粉末和50 mL溶剂, 搅拌直至粉末分散均匀、不分层后, 方可使用。

小颗粒悬浮液显现手印主要有以下三种方法, 通过比较发现喷显法能有效地控制显现试剂用量, 最大程度地获得血手印纹线与背景的反差。

滴显法：显现液与样本呈一定角度（30~45° ）时滴下溶液, 使之与样本充分接触。待30 s后用清水缓缓冲洗后再观察显现效果, 若效果不佳则重复操作, 直到显出理想效果后用电吹风将样本吹干;

浸泡法：搅动悬浮液至分散状态, 将样本浸泡30 s后用清水缓缓冲洗再观察显现效果, 若效果不佳则重复操作, 直到显出理想效果后用电吹风将样本吹干;

喷显法：用装满悬浮液的喷瓶在距离样本20 cm处进行喷显, 使溶液与样本充分接触, 待30 s后用清水缓缓冲洗后再观察显现效果, 若效果不佳则重复操作, 直到显出理想效果后用电吹风将样本吹干。

不同溶剂对钴绿粉末的分散作用不同, 有机溶剂的加入会增大钴绿小颗粒之间的排斥势能或降低吸引势能, 进而改变其与血红蛋白的相互作用效应, 最终影响到悬浮液对血手印的显现效果。在不加入表面活性剂的情况下, 本文考察了蒸馏水及5种有机溶剂对显现效果的影响, 结果见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 溶剂种类对显现效果的影响 Table 1 Effect of solvent species on developing blood fingerprint 溶剂 种类 甲醇 无水 乙醇 二甲基 甲酰胺 氯仿 丙酮 蒸馏水 （45℃） 蒸馏水 （25℃） 显现 效果 +++ ++ ++ + + +++ - 注：“ +++” 表示纹线清晰、连贯, 背景无染色或轻微染色, 反差大; “ ++” 表示纹线的连贯性、清晰度较好, 或背景客体有一定的染色, 整体的反差较好; “ +” 表示纹线的连贯性差, 清晰度低, 或者客体背景染色重整体反差弱; “ -” 表示基本无显现效果（表2~4同）。

表1 溶剂种类对显现效果的影响 Table 1 Effect of solvent species on developing blood fingerprint

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 0.5％、1.0％表面活性剂对不同客体上血手印显现效果 Table 2 Effect of 0.5%, 1.0 % surfactants on developing blood fingerprint 活性剂 客体 玻璃 瓷砖 铝合金 塑料片 人造革 胶带 粘面 A4纸 0.5 %SDS ++ ++ ++ +++ + ++ ++ 0.5 %PKO ++ + + ++ + + + 0.5 %1227 +++ +++ ++ +++ ++ +++ +++ 0.5 %DTAC +++ +++ ++ +++ ++ ++ ++ 0.5 %CAO-30 + ++ ++ ++ - + - 0.5 %DLHS + ++ + + + - - 1.0 %SDS +++ ++ ++ +++ ++ ++ +++ 1.0 %PKO ++ ++ ++ ++ + ++ ++ 1.0%1227 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ 1.0 %DTAC +++ +++ +++ +++ ++ +++ +++ 1.0 %CAO-30 + ++ ++ ++ + + - 1.0 %DLHS + ++ ++ + ++ - +

表2 0.5％、1.0％表面活性剂对不同客体上血手印显现效果 Table 2 Effect of 0.5%, 1.0 % surfactants on developing blood fingerprint

由表1可知, 钴绿在常温蒸馏水中没有显现效果, 而在甲醇、加热蒸馏水中的显现效果最好, 这说明强极性溶剂有助于提高钴绿小颗粒在体系中的分散效应。但是加热环节会加大基层人员的操作难度, 也不符合现场手印显现的要求。为了兼顾显现技术推广性和试剂的无公害性, 根据前述2.3预试验结果, 应考虑在常温条件下, 加入能改变钴绿粉末分散性质的表面活性剂来提高显现效果。

适量的表面活性剂可以增强钴绿颗粒与手印物质的相互作用, 从而起到去除背景干扰, 加大纹线与背景反差的作用, 并缩短显现时间。在确定常温蒸馏水为溶剂且纹线不被活性剂冲洗掉的前提下, 考察了0.25 %、0.5 %、1.0 %、2.0 %的SDS、PKO、1227、DTAC、CAO-30、DLHS六种表面活性剂对于血手印显现效果的影响, 实验表明活性剂浓度为1 %时显现效果最好, 结果见表2。

由表2可知, 浓度为1 %1227的钴绿小颗粒悬浮液显现效果最佳, 尤其体现在对渗透性客体上血手印的显现, 这是因为1227通过静电作用吸附钴绿颗粒, 电荷之间的斥力提高了钴绿颗粒在溶剂中的分散性能, 进而增强了悬浮颗粒与湿态蛋白之间的相互作用力, 因此获得了更好的显现效果。

钴绿小颗粒悬浮液浓度对显现效果的影响显而易见, 浓度太低会导致血手印与钴绿颗粒吸附不充分而染色效果差, 浓度过高则会增大背景干扰, 从而降低手印纹线的清晰程度。在确定浓度1 %1227的水相体系前提下, 分别考察了5 %~16 %范围内钴绿粉末的最佳浓度。由表3、图1可知, 钴绿小颗粒悬浮液显现血手印的最佳浓度应为10 %。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 不同浓度钴绿对不同客体上血手印的显现效果 Table 3 Effect of different concentrations of cobalt green on developing fingerprints on different objects 浓度 客体 玻璃 瓷砖 铝合金 塑料片 人造革 胶带 粘面 A4纸 5% + + ++ ++ + + + 8% ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ 10% +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ 13% ++ + ++ ++ + + + 16% + + ++ + + - -

表3 不同浓度钴绿对不同客体上血手印的显现效果 Table 3 Effect of different concentrations of cobalt green on developing fingerprints on different objects

图1

Fig.1

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	图1 10%钴绿、1%1227悬浮液显现不同客体上的血手印Fig.1 The developed blood fingerprints on different objects treated with 10% cobalt green and 1% benzalkonium bromide (1227) dispersed in water

陈旧血痕的显现效果往往是检验显现方法灵敏度的重要指标, 为考察钴绿小颗粒悬浮液显现试剂的时效性, 使用最佳配方分别对180 d内的血手印进行显现, 结果见表4及图2。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 不同遗留时间的显现效果 Table 4 Effect of retaining time of fingerprints on development 客体 1 d 30 d 60 d 120 d 180 d 玻璃 +++ +++ +++ +++ ++ 瓷砖 +++ +++ +++ +++ ++ 铝合金 +++ +++ +++ +++ +++ 塑料片 +++ +++ +++ +++ +++ 皮革 +++ ++ ++ ++ ++ 胶带粘面 +++ ++ ++ +++ +++ A4纸 +++ +++ ++ ++ ++

表4 不同遗留时间的显现效果 Table 4 Effect of retaining time of fingerprints on development

图2

Fig.2

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	图2 10%钴绿、1%1227悬浮液显现遗留时间180d的血手印Fig.2 The 180-day-old blood fingerprints developed with 10% cobalt green and 1% benzalkonium bromide (1227) dispersed in water

由表4、图2可知, 虽然随着时间的推移, 显现效果有所下降, 但钴绿小颗粒悬浮液对非渗透性及渗透性客体上的陈旧血手印仍有较好的显现效果, 展示了其较高的时效性及灵敏度。

在一些案件中, 犯罪嫌疑人会通过冲刷现场血痕试图掩盖关键性物证, 因此微量血手印的显现效果也是检验显现试剂灵敏度的指标之一。为考察本方法对微量血迹的显现效果, 用自来水对新鲜血液进行稀释, 观察浓度分别为50 %、25 %、12 %、6 %的稀释血手印在塑料片、纸张上的显现效果, 部分结果见图3。

实验中发现, 血液浓度的降低并没有导致显现效果的下降; 反而随着血液浓度的降低, 钴绿小颗粒的浓度会相对增加, 对于极低浓度（12 %和6 %）血手印出现过染的现象。这再次展示了钴绿小颗粒对于血痕的高灵敏度, 同时也表明对于极低浓度血手印的显现, 应相应降低钴绿的浓度方可获得最佳的显现效果。

图3

Fig.3

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	图3 5%钴绿、1%1227悬浮液显现稀释的血手印Fig.3 Results by 5% cobalt green and 1% benzalkonium bromide (1227) to develop the fingerprints made with diluted fresh blood