作者简介: 李忠杰,医学硕士,主检法医师,主要从事法医物证学检案、科研和鉴定工作。 E-mail: cmu86k11blzj@163.com
目的 检验和分析日常工作积累的盗窃类现场手套印拭子4例,探讨此类生物检材的现场勘验提取经验和DNA检验策略。方法 使用改良的硅珠法提取脱落细胞DNA,AmpFISTR Identifiler® Plus试剂盒复合扩增,3500XL遗传分析仪电泳检测和GeneMapper® ID-X软件基因分型。结果 检验的4例手套印拭子均成功获得分型。17起相关案件被侦破。结论 案件现场遗留的手套印经规范勘验和提取,采取有效检验策略和手段,可明显提高DNA分型成功率。
Objective To explore the technique and strategy about both investigation of the crime scene and DNA test for such biologically evidential materials as exfoliated cells adhered onto the glove imprints.. Methods DNA, individually extracted from four swabs of glove imprints collected in theft cases by an improved silica-bead method, was amplified by AmpFISTR Identifiler® Plus system, followed to conduct electrophoresis by 3500XL genetic analyzer, and finally undergone the genotyping by GeneMapper® ID-X software. Results DNA genotyping profile was successfully acquired from each of the four swabs. 17 cases were solved through the combination with the evidence of the DNA genotyping profile obtained above. Conclusions Glove imprints, in combination with the efficient DNA test strategy on the basis of their careful examination and extraction at crime scenes, can significantly improve DNA directivity, thereby making such biological trace-evidence exert its function effectively.
在盗窃类案件现场中, 案犯为防止在犯罪现场留下指纹常戴手套作案。手套印痕检验原本属痕迹检验范畴, 以往侧重于研究如何在戴手套作案现场提取手印, 或从手套印的成痕结构形态研究手套种属和个别特征。近年来, 随着DNA检验技术的发展, 研究痕迹、生物物证的二次利用, 即如何在手套印上提取附着的脱落细胞进行DNA分型检测, 逐渐成为公安实战研究的突破点, 迄今已有一些成功的案例报道[1, 2, 3, 4]。本文检验和分析了日常工作积累的盗窃类现场手套印拭子4例, 旨在探讨此类生物检材的现场提取经验和DNA检验策略。
选取本实验室日常检案积累的4例用棉签二次转移法提取的盗窃类现场手套印拭子。
震荡金属浴(德国Eppendorf公司); D盾超敏DNA提取试剂盒(上海惠文生物技术有限公司); AmpFISTR Identifiler® Plus(美国AB公司); 9700型扩增仪(美国AB公司); 3500XL遗传分析仪(美国AB公司); GeneMapper® ID-X软件(美国AB公司)。
将拭子按硅珠法[5]抽提纯化DNA, D盾超敏DNA提取试剂盒优化。
步骤为:① 取上述检材适量放入离心套管, 缓慢向检材滴加裂解混合液(裂解液A:裂解液B=5:1)200μ L, 99℃裂解10 min; ② 8 000 g离心10 s, 再加吸附液200μ L, 8 000 g离心2 min, 取出离心套管, 再加入吸附液800μ L, 吸附珠悬液16μ L, 室温静置15 min; ③ 8 000 g离心30 s, 尽量除去上清液, 沉淀物加- 20 ℃漂洗液800μ L, 混匀; ④ 8 000 g离心30 s, 去漂洗液; ⑤ 开盖56℃烘干1 min; ⑥ 加洗脱液20μ L, 充分混匀后56℃保温15 min; ⑦ 8 000 g离心1 min取上清液备用。采用AmpFISTR Identifiler® Plus在9700型扩增仪上对16个基因座进行复合扩增, 体系为15μ L, 其中DNA模板6μ L, 30个循环反应。取1μ L扩增产物与0.5μ L内标LIZ500和9.5μ L去离子甲酰胺混合, 以3500XL遗传分析仪毛细管电泳, Collection软件收集数据, GeneMapper® ID-X软件做等位基因分型。
在4个案例中, 前3例获得完整STR分型, 图谱峰高均在2 000以上, 均衡性较好, 质量高(见图1~3); 第4例也获得完整STR分型, 但CSF1PO、TH01基因座峰高比差异较大(见图4)。将结果导入DNA数据库, 案例1串并4起案件比中本地库人员刘某; 案例2串并6起案件比中全国库人员马吉某某; 案例3串并2起案件比中全国库人员惹记某某; 案例4串并5起案件比中省库人员吉克某某。据此, 抓获上述犯罪嫌疑人, 有关案件告破。
本文所述4例案件DNA均成功分型, 原因可能有两点:一是技术人员现场勘查细致。检材提取部位精准、使用特制的悬空包装盒、冰冻保存、送检及时; 二是实验室检验策略恰当。对于手套印等接触类生物检材, 大多属于痕量DNA, 由于扩增模板量相对较低, 检验时对DNA模板的浓度和纯度要求更高。本文4例拭子基于硅珠法优化实验步骤, 使用套管裂解后离心, 方便除去棉签载体, 并充分获取裂解产物, 加入大体积吸附液维持高浓度胍盐体系, 提升硅珠吸附DNA效率。配合离心法每步充分弃除废液, 所以只需低温漂洗一次即可除净体系中的杂质和扩增抑制物, 减少了DNA在提取和纯化环节中的流失, 最后加入20μ L洗脱液充分加热洗脱, 有效保证了DNA模板的纯度和浓度。整个提取过程操作简便易行, 扩增图谱均衡性好, 峰高合适, 分型效果理想。本文4例手套印拭子DNA图谱峰型比例相对均衡, 可信度高。
手套印是戴手套作案时, 手套外表面与客体接触留下的印痕。一般认为, 手套内表面会留有较多量的脱落细胞, 手套外表面与手直接接触少且时间短, 故外侧附着脱落细胞的可能性小。本文手套印拭子成功获得有效DNA分型, 说明上述观点并非正确。相反, 该类客体上可能留有足够的脱落细胞而可以检出DNA分型。手套印上脱落细胞的来源可能是:① 作案人在拿取、戴脱手套过程中手指接触手套外表面, 将手部表皮脱落细胞转移到手套上, 多次或长时间拿取手套时手部脱落细胞会更多地转移到手套上; ② 一些纱手套印会以汗潜形式存在, 天气炎热、作案人心理紧张分泌汗液, 会将脱落细胞从细纱手套的纱线间隙浸渗到手套外面; ③ 作案人戴手套时接触自己其它部位皮肤, 将脱落细胞转移到手套上。
但是, 在实际工作中, 对于手套印拭子检出的有效DNA分型, 需确定手套印上擦拭转移的脱落细胞是否为作案人自身所留, 如系第三人的, 则有可能导致冤假错案。本文4起案件中提取的手套印拭子检出的有效DNA分型经作案人交代得到了印证, 确为罪犯所留无疑。
手套印附着脱落细胞的成功检验, 给手套印这一传统痕迹带来了新的生命, 为打击职业犯罪提供了新的技术支撑。现场勘验人员和DNA检验人员需对这类检材有更新更深的认识和信息互动, 以更好地发挥微量物证打击犯罪的作用。现场勘验人员应根据现场情况、结合犯罪动作、分析作案过程和行为, 善于观察, 更准确更规范地采集提取(如非渗透性客体表面采用棉签湿干两步擦拭法)物证, 力争在充分转移的同时又不盲目扩大擦拭范围, 防止出现无效混合数据而降低检验鉴定的效能。
The authors have declared that no competing interests exist.
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