液相色谱-质谱联用仪Waters Xevo TQ MS（Wat-ers, 美国）; 电子天平Sartotius BP210S（Sartotius, 徳国）; 所用试剂均为色谱纯, 水为超纯水（18.2W）。

测量方法参照本实验室IFSC 04-01-04-2011《生物样品中吗啡、单乙酰吗啡的液相色谱检验方法》。取生物体液检材1mL于15mL具塞试管中, 加入乙腈, 振荡、离心, 分离有机相, 浓缩至干, 加1mL甲醇或乙腈溶液定容, 0.22μ m微孔有机滤膜过滤, 供仪器分析。取相应空白体液1mL, 添加100ng吗啡, 按上述操作规程与检材平行操作。检材溶液与添加吗啡的溶液分别进样3μ L, 峰面积各取平均值, 以外标峰面积比较法定量。

液相色谱质谱联用法测定体液中吗啡含量的定量数学模型为：

式中：w — 体液中吗啡的质量分数, ng/mL; f _rep — 重复性校正因子;

m — 添加吗啡总量, ng; A_T — 添加色谱峰面积平均值;

A_i — 检材色谱峰面积平均值; V— 检材量, mL。

又由于m=c₀· V_i

式中：m — 添加吗啡总量, ng; c₀— 吗啡标准使用液的浓度, ng/mL;

V_i— 移取标准使用液的体积, mL。

所以

从测量过程和数学模型上分析来源并量化合成。

2.2.1 重复性校正因子f_rep引入不确定度u(f_rep)

来源于测量方法的重复性。取10份检材, 按照1.2项下处理, 10次测量平均值为224.3ng/mL, 并根据贝塞尔公式计算标准偏差为7.15。

则,

2.2.2 标准使用液c₀引入不确定度u（c₀）

来源于标准储备液的制备和标准储备液稀释成标准使用液的过程。

2.2.2.1 标准储备液

称取吗啡纯品100mg置于100mL 容量瓶中配制成1mg/mL的溶液。

数学模型：

式中：c₁ — 标准储备液的浓度, mg/mL ; m₁— 吗啡纯品的质量, g;

V₁— 标准储备液定容体积, mL。

（1）m₁引入标准不确定度u (m₁)

假定为矩形分布, 换算成标准不确定度为 mg。净重由两次称量操作所得, 一次为皮重m_1tare, 另一次为毛重m_1gross。因每一次称重均为独立观测结果, 故计算两次。称取100mg样品引入标准不确定度为： 。相对标准不确定度为：

（2）V₁引入标准不确定度u (V₁)

1）校准对体积的影响u₁(V₁)：合格的A级100mL容量瓶, 依据JJG196-2006《常用玻璃量器》, 最大允差Δ V₁为± 0.10 mL, 假定为矩形分布, 则 mL

2）温度对体积的影响u₂(V₂)：实验温控在20℃± 3℃, 有机液体膨胀系数1.0× 10^-3℃^-1, 因此产生的体积变化为 , 假定温度变化为矩形分布, 则

将上述V₁不确定度分量合成 。相对标准不确定度为：

故

2.2.2.2 稀释过程

用100~1000mL可调移液器吸取V₂=1mL标准储备液, 置于100mL容量瓶中, 稀释定容。再用100~1000mL可调移液器吸取1mL稀释液, 置于100mL容量瓶中, 稀释定容, 制成标准工作液。

（1）100~1000mL可调移液器引入标准不确定度u(V₂)

1）校准对体积的影响u₁(V₂)：已知100~1000mL可调移液器取1000mL样品时容量允差为± 1.0%, 取矩形分布, 相对标准不确定度为：

2）温度对体积的影响u₂ (V₂)：实验温控在20℃± 3℃, 有机液体膨胀系数1.0× 10^-3℃^-1, 因此产生的体积变化为 , 假定温度变化为矩形分布,

则

将上述V₂不确定度分量合成：

（2）100mL容量瓶引入标准不确定度

同u(V₁), 在重复性校正因子f rep引入不确定度u(f rep)中已考虑, 此处不重复计算。

2.2.2.3 合成标准不确定度u(c₀)

2.2.3 生物检材移取V引入标准不确定度

同u(V₂), 在重复性校正因子f _rep引入不确定度u(f _rep)中已考虑, 此处不重复计算。

2.2.4 移取标准使用液V_i引入标准不确定度

同u(V₂), 在重复性校正因子f _rep引入不确定度u(f _rep)中已考虑, 此处不重复计算。

2.2.5 合成标准不确定度的计算

表1为不确定度分量表。将表1中各不确定度分量合成

检材中吗啡含量的测定结果为：224.3 ng/mL , 则

表 1

Table 1

表 1(Table 1)

表 1 不确定度分量表 Table 1 Constituent factors of uncertainty 符号 说明 相对标准不确定度u(x)/x 不确定度类型 f rep 重复性校正因子 0.010 A类 c0 吗啡标准使用液的浓度 0.0063 B类

表 1 不确定度分量表 Table 1 Constituent factors of uncertainty

2.2.6 扩展不确定度的计算

2.2.7 测量结果表示

检材中吗啡的含量：(224.3± 5.4)ng/mL, k=2

本文以测定体液中吗啡含量为例, 讨论了不确定度的主要来源及其各不确定度分量评定方法。分析影响测量不确定度结果的各个因素, 比较其对总测量不确定度的贡献。可以看出, 主要来源是测量的重复性引起的。因此在吗啡类案件的检验鉴定中, 要多人多次重复测量。