汗潜指印上有脱落细胞, 通常是由手指皮肤本身的脱落细胞和手指触摸身体其它部位而粘附的脱落细胞两部分组成。上皮细胞角化后, 细胞核消失, 但有些细胞尚未完全角化就脱落了, 因此汗潜指印中含有未完全角化细胞, 从中有可能获得未完全降解的核DNA。在交通事故中, 汽车方向盘和变速杆上往往留有汗潜指印, 这些指印中有脱落细胞, 这些细胞蕴含着驾驶人DNA信息, 有助于确定驾驶人, 对肇事司机身份的确认具有一定的意义。但提取这些DNA有一定的技术难度:(1)DNA量极少, 属于低拷贝模版; (2)样本搜集过程中可能损失或被污染; (3)显现指印的方法对DNA检出率也有影响。

为获得准确的结果, 本案例对汗潜指印DNA提取采用了以下措施:(1)运用502胶熏显指印^[1]。502胶是以α -氰基丙烯酸乙酯为主要成分的粘合剂, 显现指印灵敏度高、清晰度高、应用范围广, 由于汗液中存在水和氨基酸, 有少量阴离子存在, 502胶汽化氰基丙烯酸单体在这些水或弱碱的引发下, 发生聚合形成固体状的指印, 聚合是由单体变成高分子的过程, 并不会对汗液中的脱落细胞造成破坏影响。(2)采取EZ-tape胶带采集DNA^[2]。因为车辆方向盘表面多为塑料、皮革、橡胶和金属等属于非渗透性载体, 利用EZ-tape胶带的充分粘取, 可以将非渗透性载体上的指印物质转移的比较彻底, 用于DNA检验。(3)运用 Chelex-100和磁珠法纯化相结合提取DNA^{[3, 4]}, 提高了纯化效率。提取时, 用干净镊子将胶带放进0.5mL离心管中, 尽量放管底, 加5% Chelex-100 130μ L, 刚好浸没整个胶带, 向离心管中加5% 蛋白酶K 6μ L, 在金属恒温浴上56℃保温130min, 100℃煮沸16min, 13000r/min离心5min, 将上清液转移至另一干净离心管中, 转移时尽量避开Chelex颗粒。将上清液用IQTM磁珠法^[5](Promega公司)进行了DNA纯化, 即向离心管中加入与上清液等体积的裂解液, 振荡后再加入7μ L的磁珠, 室温放置5min, 涡旋振荡后将离心管放到磁架上, 小心吸去溶液, 用100μ L裂解液洗涤1次, 涡旋振荡后将离心管放到磁架上, 去除所有裂解液, 用100μ L洗涤液洗涤3次, 每次涡旋振荡使磁珠悬浮, 最后一次要去除所有洗涤液, 打开离心管盖子, 置磁架上, 室温干燥10min, 加入100μ L去离子水, 盖好盖子, 充分涡旋振荡后, 65℃加热5min, 取出离心管, 涡旋振荡后, 立即将离心管放在磁架上, 吸出溶液, 以备检验。运用Chelex-100法时, 延长了消化和煮沸时间, 获得了良好的结果。适当的延长消化和煮沸时间有利于裂解细胞核, 使DNA释放的更为完全, 但胶带本身可能会在高温下产生抑制PCR反应的物质, 为此, 在用Chelex-100法提取完DNA后, 又用磁珠法对DNA进行了纯化, 通过磁珠纯化, 有效的去除了PCR抑制物, 浓缩了DNA模板。(4)在9700型PCR扩增仪上扩增, 采用10μ L反应体系, 其中加入4μ L DNA模板, 以提高体系中模板浓度, 从而提高了灵敏度。(5)应用低拷贝模板PCR技术^[6], 在扩增时, 增加PCR循环数至32个循环。(6)用ABI3130型基因分析仪检
测, 并延长进样时间为10s, 如果DNA分型结果不理想, 如等位基因丢失、不平衡及杂带情况, 以相同条件再扩增3次, 单独及混合4次扩增产物检测, 综合分析结果, 防止基因型错误判型。

综上所述, 汗潜指印脱落细胞DNA检验对侦破交通肇事逃逸疑难案件, 确定驾驶员有很大的实用价值, 虽然现在由于技术的限制, 提取方法还不十分完善, 但相信未来随着DNA检测技术的飞速发展, 将会在驾驶员身份确定方面起到不可替代的作用。