白灰墙面上血迹DNA的提取
引用本文
那春福, 刘朝英, 王有凤, 卜泓月, 关红玉. 白灰墙面上血迹DNA的提取[J]. 刑事技术,2014,39(6): 65-66
[J]. Forensic Science and Technology,2014,39(6): 65-66
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[J]. Forensic Science and Technology,2014,39(6): 65-66
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白灰墙面上血迹DNA的提取
关键词:
DNA检验; Chelex-100; 比较
中图分类号:DF795.2
文献标志码:B
文章编号:1008-3650(2014)06-0065-02
白灰墙面上遗留血迹是在现场勘查中经常遇见的。目前现勘人员主要采取第一种刮削法、第二种棉签(或纱线)擦拭法进行提取, 针对极少量检材也有采取第三种提取方法即胶带粘贴固定与刮削并用的提取方法。在实际检案中, 由于白灰中含有抑制扩增反应的成份, 检出DNA效果不佳。本文就上述3种方法提取的血迹, 用Chelex-100方法进行消化处理, 对如何制备低抑制、高纯度的DNA模板方法进行探讨。
1 方 法
1.1 DNA模板的制备
1.1.1 Chelex-100方法 分别将第一种方法提取的刮削带有血迹的白灰墙面碎块、第二种方法提取的用洁净剪刀剪取擦拭白灰墙面血迹的棉签(或纱线)少许、第三种方法提取的用洁净剪刀剪取将胶带粘贴固定与刮削并用的白灰墙面血迹少许, 用湿棉签或纱线擦拭第一种及第三种提取白灰墙面带血部位少许, 直接置于1.5mL离心管内, 采用Chelex-100方法提取DNA[1]。
1.1.2 硅胶柱法 将第一、三种方法提取的白灰墙面上血迹采用Qiagen 公司的QIAamp DNA micro试剂盒提取DNA[2], 最终用洗脱液10μ L洗脱, 备用。
1.1.3 磁珠法 将第一、三种方法提取的白灰墙面上血迹采用Qiagen 公司的EZⅠ 核酸自动提取仪提取DNA[3], 最终用洗脱液40μ L洗脱, 备用。
1.2 PCR-STR检测
使用AB公司Sinofiler试剂盒对上述8种获取的DNA溶液进行PCR扩增(使用9700扩增仪, 95℃ 10min, 94℃ 1min, 59℃ 1min, 72℃ 1min循环28次, 60℃ 60min)。使用ABI 3130XL测序仪对扩增产物进行电泳检测(内标使用LIZ 500), 使用GeneMapper3.2分析软件进行分析。
2 结 果
Chelex-100方法:第一、三种方法未获得DNA分型图谱, 第二种、第四种方法成功获得DNA分型图谱(见图1、图2)硅胶柱法:均未获得DNA分型图谱。
磁珠法:均获得DNA分型图谱。
 | 图1 棉签擦拭白灰墙面STR分型结果 |
 | 图2 棉签转移擦拭白灰墙面STR分型结果 |
3 讨 论
Chelex是由苯乙烯与二乙烯苯的共聚体组成的螯合树脂, 其亚氨基二乙酸侧链起着螯合金属离子的作用, 防止在其煮沸过程中DNA的降解, 在高温低离子强度下也起着催化DNA释放的作用。适用范围广泛, 易于操作, 成本低廉, 但不能有效去除杂质和降解的DNA片段; 硅胶柱法是硅胶膜在高盐酸胍盐、低pH值的缓冲液中专一性吸附DNA, 而在低TE或水溶液状态下, DNA又被有效地释放出来。在抽提洗涤过滤过程中, QIAamp DNA micro柱能够有效地去除PCR抑制物。上述两种方法都未能去除白灰墙面中的抑制物, 直接影响STR的检测。目前磁珠法提取DNA得到了广泛应用, 它是利用细胞裂解液促进细胞膜、核膜发生变化, 获得DNA片段后, 通过硅胶磁珠作载体在MTL环境中结合DNA, 而杂质在浓度80%的乙醇3次洗涤过程中被吸弃, 最后通过洗脱程度, 将磁珠上吸附的DNA释放于水中。实验证明应用磁珠能更有效地去除白灰墙面的抑制物。对于没有应用磁珠法检验的DNA实验室, 建议提取白灰墙面上血迹时, 应用湿棉签或纱线擦拭法。对于采用第一、第三种方法提取白灰墙面血迹检材, 在实验室内可以应用湿棉签或纱线进行再次转移, 然后用Chelex-100进行处理, 会获得良好的检验结果。
The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
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