某年1月22日, 某地发生1起涉毒案件, 涉毒人员张某被当场抓获, 民警在其随身携带的礼品包装袋中发现若干毒品, 张某对毒品来源拒不交待。民警将该礼品袋送至DNA实验室进行检验。

毒品由透明胶固定于礼品盒内小夹层中, 强光条件下可见透明胶两断端人体指纹印, 剪取两处指纹印痕迹的透明胶带, 分置于2个带过滤篮的2.0mL试管中。另取纳米棉签干湿两遍擦拭毒品包装袋表面, 置于带过滤篮的2.0mL试管中。

向上述3个2.0mL试管中分别加入480μ L Buffer ATL和20μ L蛋白酶K溶液, 于56℃振荡混匀仪上900rpm消化2h, 后置离心机13000r/min离心3min, 弃带载体的过滤篮, 各个样本液均加入1μ L载体RNA, 混匀后短暂离心, 置于QIAcube 上得20μ L纯化DNA模板。

用Identifiler Plus^TM试剂盒(AB公司, 美国)在9700型扩增仪(AB公司, 美国)上进行扩增。反应总体积10μ L, 含模板2μ L, Reaction Mix 4μ L, Primer Set 2μ L, H₂O 2μ L。用3130XL分析仪(AB公司, 美国)对扩增产物进行毛细管电泳分离, 使用Genemapper ID 3.2软件进行数据分析。

结果显示, 一处透明胶指纹印获得有效分型数据(见图1), 录入到数据库中比中前科人员李某。另一处透明胶指纹印长片段基因座(D7S820、D13S317、D18S51)等位基因部分缺失, 其余基因座等位基因分型与李某DNA分型一致。毒品包装袋擦拭棉签获得混合分型数据(见图2), 其中以李某DNA分型为主。

图1

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	图1 透明胶断端处指纹印STR分型图谱

图2

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	图2 毒品包装袋擦拭棉签STR分型图谱

毒品案件中, 由于涉毒分子常采用“ 雇人运毒、人货分离” 等方式从事交易, 公安机关即使抓获持毒人员, 还是难以查出毒品来源。本案例中检验人员认真查看涉毒物证, 分析粘贴透明胶带的习惯, 在透明胶带上发现了人体指纹印, 指纹印中往往含有微量的人体脱落细胞^[1], 但受DNA来源、含量、载体特性及检验方法等因素的影响, 其检出有效基因分型的可能性< 30%^[2]。本例从透明胶带断端处成功检出单一DNA分型, 对应的等位基因峰值均在400RFU以上, 支持所检出DNA成分为犯罪人员李某所留。此次检验的成功, 主要受益于以下几个方面:

(1)载体特性。透明胶带作为一种具有强力粘取作用的载体, 使得人体脱落细胞被大量粘附, 为DNA的成功检验提供了可能。

(2)载体的转移方法。为保证获得单一且足够检出有效分型的脱落细胞, 转移过程中先用酒精棉擦拭两处断端光滑面, 风干后剪取含指纹印的断端部分转移至2.0mL试管中, 最大程度减少转移过程DNA的损失。

(3)选择QIAcube自动纯化仪提取微量DNA。对于此类DNA含量低、杂质少的样品, QIAcube自动纯化仪的提取效率显著高于Chelex法、IQ磁珠法与硅珠法的提取效率。QIAamp MinElute柱上的硅胶膜对微量DNA的结合作用更强^[3], 且载体RNA的加入不仅可以增加DNA与硅胶膜的结合, 还可有效减少提取过程中DNA的损耗。QIAcube自动纯化仪实现了提取过程的完全自动化, 有效减少了提取过程转移造成的人为损耗DNA量和避免了外来污染的可能。

实际案例中的微量物证DNA来自表皮脱落细胞, 而指纹印中的表皮脱落细胞核多数已退化并消失, 只有部分未完全角化细胞的细胞核依然存在^[4], 这成为指纹印DNA检验成功的基础。Federica Alessandrini等^[5]认为, 指纹印中提取到的DNA量具有随机性, 并无确定的规律, 这主要与两个因素有关:一是个体手上表皮脱落细胞的易脱落程度; 二是DNA提取方法的好坏。笔者认为对指纹印类的微量物证的检验应按照因材制宜、分别检验、浓缩处理的原则, 最大程度地减少在提取微量物证DNA过程中的DNA损耗量, 对可直接剪取的物证载体(如胶带、纸张等)应尽量整体置于裂解体系中进行消化, 不应选择粘取或棉签擦拭的方式进行转移, 对固体载体(如玻璃、门、桌面等)上的微量物证应考虑用细胞粘取器进行粘附转移再用纳米棉签干湿两遍法擦拭, 以最大程度获得脱落细胞。另外, 选择提取方法也非常重要, 本文中选择QIAcube自动纯化仪提取微量物证获得了较好的检验结果, 为案件侦破提供了重大线索, QIAcube提取过程中做到了零转移, DNA损耗量极大降低, 微量物证在带过滤篮的2.0mL试管中裂解, 以离心的方式过滤载体上的DNA成分, 减少了转移过程的损耗。QIAamp MinElute柱上的硅胶膜相比于硅珠、磁珠等对DNA的吸附作用更强, 且通过在管内的洗涤与洗脱, 杂质去除更彻底。本文的结果可以提供给法医DNA检验人员在检验微量DNA检材时选择提取方式、提高检验成功率方面提供参考。