利用Chelex100法得到的56份检材精斑STR分型结果中, 26份检材结果较好, RUF值在1000 ~3000之间, 位点之间峰值均衡性较好; 其余30份存在小片段优势扩增、大片段峰值较低或没有出峰等扩增不平衡现象, 或者存在较多的杂带(见图1)。而由DNA IQ试剂盒在Biomek^®2000全自动核酸工作站上提取的56份检材精斑STR分型结果中, 全部得到正确精斑STR分型结果, RFU值在1000~3000之间, 而且不同位点的峰值高低均匀、无杂带(见图2)。

图1

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	图1 Chelex100法提取精斑STR分型结果

图2

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	图2 DNA IQTM自动化磁珠法提取纯化精斑STR分型结果

由于女性阴道分泌物成分复杂, 往往因混有大量女性白带物质和肠道细菌等, 且其中有些成分是扩增的抑制物, 因此, 利用Chelex100法对混合斑中精斑进行提取, 不能有效去除各种PCR扩增抑制因子, 从而造成PCR反应的不平衡扩增、STR分型图谱基线不平整、出现无关杂带, 干扰了对分型结果的判读。应用传统的两步法(饱和酚氯仿提取精斑)对混合斑中精斑进行提取, 可以通过饱和酚氯仿的抽提很好的去除各种PCR扩增抑制因子, 得到较好的精斑STR分型结果, 该方法的缺点是方法繁杂, 在大批量检材提取时由于需要多次转换试管操作容易出错, 而且精子DNA无法粗略定量, 许多情况由于精斑含量过高超过了PCR反应对模板的耐受范围, 造成小片段优势扩增和大片段扩增不完全和位点的缺失。需重复扩增调整才能得到满意结果。

利用DNA IQ试剂盒^{[3, 4]}在Biomek^®2000全自动核酸工作站上提取混合斑中的精斑DNA, 很好地解决了上述问题, 在去除女性成分的纯精斑中, 加入混有1mol/L DTT 8μ L的裂解液(Lysis Buffer)对精子细胞DNA进行裂解释放, DNA IQ试剂盒是利用磁珠法原理对DNA进行提取纯化, 通过磁珠结合DNA、洗涤、洗脱3步自动化操作, 获得纯净的目标DNA^[5], 由于一定量的磁珠(每个样本加入7μ L 磁珠)吸附一定量值范围的DNA, 而且磁珠不吸附除DNA外的其他杂质, 这样, 既实现对精斑DNA的半定量, 又去除了PCR抑制物的干扰作用, 从而得到精斑DNA的优化分型。Biomek^®2000全自动核酸工作站是由美国贝克曼-库尔特公司开发的全自动核算提取平台, 一次程序可以在约2h 40min内自动完成96个样品的DNA提取, 具有提取速度快、准确程度高、不易出错等优点。由于在社会转型期中刑事犯罪高发不下, 新修订颁布的《刑事诉讼法》已于2013年1月1日实施, 必将对作为刑事诉讼重要证据之一DNA证据提出了更高的要求^[6], 法医DNA鉴定人员面对的也是批量的性犯罪生物检材, 利用DNA IQ试剂盒在Biomek^®2000全自动核酸工作站上批量提取混合斑中的精斑DNA, 无疑大大提高了工作效率, 也提高了工作的准确度, 更好的避免了错误的几率。