植物孢粉的提取和检验方法研究
宣瑜1, 吴升武1, 郝丽艳2, 郭建1, 林瑾珲1, 郑武1
1.福建省福州市公安局刑事侦查支队技术处 350003
2.福建警察学院,福州 350007

作者简介:宣 瑜(1982— ),男,江苏省常州市人,工程师,博士,主要从事毒物、毒品、微量物证检验工作。Tel:15880085264;E-mail:xuanyu@bit.edu.cn

摘要

目的 研究植物孢粉的提取和检验方法。方法 用导电胶粘取衣物中孢粉及用有机溶液和稀酸溶液浸泡分离的土壤中孢粉,采用扫描电镜研究孢粉的显微形貌。结果 根据孢粉的形状、粒径大小、表面纹饰、外壁图案等形貌特征能鉴别不同种类的植物孢粉,且根据土壤中所含孢粉种类区分福州市5类山地土(于山土、屏山土、森林公园土、乌山土和鼓山土)。结论 该方法准确可靠、简单易行,具有良好的重现性,能有效地提取和检验植物孢粉及区分土壤。

关键词: 孢粉; 显微形貌; 扫描电镜; 土壤
中图分类号:DF793.2 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2014)05-0003-03
Research of sampling and examining plant pollen
XUAN Yu, WU Sheng-wu, HAO Li-yan, GUO Jian, LIN Jin-hui, ZHENG Wu
Abstract

Objective To establish a method for sampling and examining plant pollen. Methods Pollen on the clothes was collected by adhering to conducting resin, and pollen in soil was collected by adhering to conducting resin after soaking in organic solution and diluted acid. Microstructure of pollen was analyzed by SEM. Results Different kinds of plant pollen can be identified according to the shape, size, surface pattern and aperture of pollen, and five kinds of mountain soils can be distinguished according to different kinds of plant pollen contained in soils.Conclusion Methodestablished is accurate, reliable, and effective in sampling and examining plant pollen and distinguishing soils.

Keyword: pollen; microstructure; SEM; soil

植物孢粉包括花粉和孢子, 是植物传递雄性生殖细胞的繁殖器官, 具有粒径微小、易于转移和粘附、种类特征性强的特点, 且由于植物孢粉壁具有良好的耐机械磨损、耐生化腐蚀和抗高温性能, 使得孢粉从植物体脱落后在不同环境中均能长期保存。因此, 根据嫌疑人身上及其携带物品所粘附的特定类型孢粉, 可为判断该犯罪嫌疑人的行动轨迹及案发现场提供信息, 在案件侦破中起到重要作用[1, 2]

本文针对衣物及土壤中植物孢粉的提取开展研究, 建立简单易行的孢粉提取方法, 满足刑事办案快速、实用的要求。采用扫描电镜研究植物孢粉的显微形貌, 根据孢粉的显微形貌区分不同种类, 且根据土壤中所含植物孢粉种类区分福州市5类山地土。

1 材料和方法
1.1 材料

仪器:FEI NONA NANO SEM型场发射扫描电镜(FESEM)

试剂:乙酸乙酯、30%HCl溶液

样品:分别采集白果花、牵牛花和朱槿花, 将其花粉撒落在棉布衣物上作为检材备检; 在福州市分别提取屏山土、于山土、森林公园土、乌山土和鼓山土作为检材备检。

1.2 孢粉物证的提取和检验方法

1.2.1 孢粉物证的提取 对于衣物上的孢粉, 用导电胶在衣物上粘附孢粉的部位反复粘取, 直到导电胶失去粘性。

在福州地区分别提取屏山土、于山土、森林公园土、乌山土和鼓山土, 在每个取样点平行提取土壤5次, 各取表层土5g, 将提取的土壤放入离心管中, 用乙酸乙酯溶液浸泡土壤样品, 涡旋振荡后浸泡10min, 去除孢粉表面附着的油脂类物质, 离心后收集乙酸乙酯上清液。然后, 用30%的HCl溶液浸泡土壤样品, 涡旋振荡后浸泡10min, 去除孢粉表面附着的碳酸盐, 离心后收集稀盐酸上清液。合并乙酸乙酯及稀盐酸上清液, 过滤后将滤纸烘干, 用导电胶粘取滤纸上的植物孢粉, 直到导电胶失去粘性为止。

1.2.2 孢粉物证的检验 对于导电胶粘取的植物孢粉, 喷金后采用扫描电镜观察其显微形貌, 试验条件为高真空, 加速电压25kV, 工作距离5mm, 束斑5.0。针对土壤样品, 分别对每个取样点平行提取的土壤进行孢粉的提取和检验研究, 即对每个土壤样品进行5次平行试验。

2 结 果

采用导电胶分别提取棉布衣物上的白果花、牵牛花和朱槿花孢粉, 采用扫描电镜分别研究其显微形貌, 试验结果如图1所示。图1(a) 展示了白果花孢粉的显微形貌呈椭球形, 孢粉大小为40μ m× 18μ m, 且该孢粉具有一个长为37μ m的沟槽, 外壁表面具有较密的穴点状粗糙纹饰。图1(b)展示了牵牛花孢粉的显微形貌呈圆球形, 粒径为65μ m, 外壁表面具有末端尖锐的刺状纹饰, 刺长为7μ m。图1(c)展示了朱槿花孢粉的显微形貌与牵牛花孢粉相似, 其形状均呈圆球形, 且外壁表面均具有刺状纹饰, 然而, 不同于牵牛花孢粉, 朱瑾花孢粉粒径较大, 其粒径为127μ m, 且朱瑾花孢粉外壁的刺状纹饰末端较钝, 刺长为15μ m。可见, 用导电胶粘取的方法能提取衣物表面粘附的植物孢粉, 且根据孢粉的形状、粒径大小、外壁表面纹饰和萌发孔等显微形貌特征能区分白果花、牵牛花和朱槿花孢粉。

图1 衣物中孢粉的显微形貌(a 白果花, b 牵牛花, c 朱槿花)

提取土壤样品中的植物孢粉后, 采用扫描电镜研究其显微形貌, 对于相同取样点平行提取的土壤样品, 其孢粉显微形貌相同, 说明针对土壤样品所含孢粉的提取和检验方法具有良好的重现性。图2展示了于山土所含植物孢粉的显微形貌, 可见, 于山土中含有两种类型的植物孢粉, 其中一种形状近似扁球形, 粒径大小为26μ m× 20μ m, 外壁表面具有皱波状纹饰, 如图2(a)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为西南红山茶属孢粉[3]; 另一种形状为扁球形, 孢粉大小为27μ m× 21μ m, 外壁表面具有较浅的沟槽状凹陷, 外壁表面粗糙, 呈现穴状纹饰, 如图2(b)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为米仔兰属花粉[3]

图2 于山土中孢粉的显微形貌(a西南红山茶属, b米仔兰属)

图3展示了屏山土所含植物孢粉的显微形貌有两种类型, 其中一种形状呈椭球形, 孢粉大小为38μ m× 25μ m, 该孢粉具有直径为1.6μ m的圆形单萌发孔, 孔缘加厚, 隆起呈近圆环形, 外壁表面具有的细颗粒状纹饰, 如图3(a)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为慈竹属孢粉[3]; 另一种形状亦呈椭球形, 孢粉大小为16μ m× 13μ m, 外壁表面具有模糊的细皱纹饰, 如图3(b)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为榕属花粉[3]

图3 屏山土中孢粉的显微形貌(a慈竹属, b榕属)

图4展示了森林公园土中所含植物孢粉的显微形貌中含有两种类型的植物孢粉, 一种形状呈球形, 粒径大小为22μ m, 外壁表面具有细颗粒状纹饰, 如图4(a)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为柏木属孢粉[3]; 另一种形状近似扁球形, 孢粉大小为29μ m× 18μ m, 外壁表面具有皱波状纹饰, 如图4(b)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为西南红山茶属孢粉[3]

图4 森林公园土中孢粉的显微形貌(a柏木属, b西南红山茶属)

图5展示了乌山土中所含植物孢粉的显微形貌含有一种植物孢粉, 其形状呈近似椭球形, 孢粉大小为22μ m× 14μ m, 外壁表面具脑纹状纹饰, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为大头茶属孢粉[3]

图5 乌山土中孢粉的显微形貌(大头茶属)

图6展示了鼓山土中所含植物孢粉的显微形貌含有3种类型植物孢粉, 其中一种形状呈近似球形, 孢粉大小为39μ m, 外壁表面具有脑纹状纹饰, 如图6(a)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为杜虹花孢粉[3]; 另一种形状近似扁球形, 孢粉大小为30μ m× 22μ m, 外壁表面具有皱波状纹饰, 如图6(b)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为西南红山茶属孢粉[3]。第3种孢粉体长41μ m, 体高为8μ m, 由体和椭球形气囊两部分组成, 该孢粉粒具有两个气囊, 气囊大小为29μ m× 20μ m, 如图6(c)所示, 与植物孢粉图志比对, 该孢粉为松科孢粉[3]

图6 鼓山土中孢粉的显微形貌(a 杜虹花, b西南红山茶, c松科)

表1展示了于山土、屏山土、森林公园土、乌山土和鼓山土中所含植物孢粉种类, 5类山地土中均含有不同种类的植物孢粉, 根据土壤中所含的植物孢粉种类, 可以区分福州市于山土、屏山土、森林公园土、乌山土和鼓山土5类山地土。

表1 福州市5类山地土所含孢粉种类
3 讨 论

由于不同种类的植物孢粉均具有特殊显微形貌特征, 该特征为植物孢粉的区分提供了依据。植物孢粉体积微小, 若粘附在衣物上不易彻底清除, 且由于植物孢粉的外壁所含的孢粉素极难氧化分解, 耐高温、高压和酸碱腐蚀, 使得孢粉能够长久地保存其形态特征, 因此, 植物孢粉作为成为微量物证的重要分支, 在刑事办案中起到重要作用。由本文的研究结果可知, 采用导电胶粘取的方法能提取衣物上粘附的植物孢粉, 经喷金后采用扫描电镜研究孢粉的显微形貌, 根据孢粉形状、粒径大小、外壁表面纹饰和萌发孔等显微形貌能够鉴别白果花、牵牛花和朱瑾3类植物孢粉。

由于植物孢粉成熟之后, 经风、水、动物等媒介脱离植物母体, 大多数落在土壤中且保存下来, 因此, 在一定范围内土壤所含植物孢粉种类反映了特定的地理生态环境, 针对土壤中孢粉种类的研究能够作为区分土壤的依据。土壤中孢粉的有效提取是对其进行检验研究的前提, 然而, 相对于衣物中粘附的植物孢粉, 土壤中孢粉的提取更困难。由于植物孢粉体积较小, 极容易被土壤掩盖, 如何从土壤中分离土壤是提取孢粉的关键。本文利用植物孢粉密度较小的原理, 分别采用有机溶液和稀酸溶液浸泡土壤样品, 使得土壤中的植物孢粉漂浮在溶液上层, 高速离心即可分离植物孢粉, 且在提取过程中, 采用有机溶液和稀酸溶液浸泡能有效地去除了植物孢粉表面的油脂、碳酸盐等附着物。采用该方法, 减轻了残留的土壤微粒对植物孢粉的包覆掩盖, 经扫描电镜研究, 土壤中的植物孢粉均呈现较清晰的显微形貌。研究结果表明, 试验土壤样品均含有植物孢粉, 且多数土壤样品含有多种不同种类的植物孢粉, 通过研究植物孢粉的形状、粒径大小、外壁表面纹饰等形貌特征, 与植物孢粉标准图谱相比对, 能区分土壤中所含不同种类的植物孢粉。根据土壤样品中所含植物孢粉种类能区分福州市于山土、屏山土、森林公园土、乌山土和鼓山土5类山地土。该方法准确可靠、简单易行, 具有良好的重现性, 是一种有效的提取和检验孢粉物证的方法。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 张幼芳. 植物物证检验及其在法庭科学中的应用[J]. 中国法医学杂志, 2003(4): 253-255. [本文引用:1]
[2] 杨梦兰, 闽素英, 王岩, . 不同客体上花粉的检验[J]. 广东公安科技, 2002(2): 19-23. [本文引用:1]
[3] 李天庆, 曹慧娟, 康木生, . 中国木本植物电镜扫描图志[M]. 北京: 科学出版社, 2011: 1072. [本文引用:10]