引用本文
郭晓涛, 郭建伟, 杜勇, 李勇, 陈雪梅. Maxwell 16裂解纯化法提取陈旧精子DNA的应用[J]. 刑事技术,2014,39(5): 12-13
GUO Xiao-tao, GUO Jian-wei, DU Yong, LI Yong, CHEN Xue-mei. Application of Maxwell 16 in DNA extraction from old semen samples[J]. Forensic Science and Technology,2014,39(5): 12-13  
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Maxwell 16裂解纯化法提取陈旧精子DNA的应用
郭晓涛1, 郭建伟1, 杜勇1, 李勇1, 陈雪梅2
1.河南省鹤壁市公安局刑侦支队,458030
2.广东省惠州市公安局刑侦支队,516000

作者简介:郭晓涛(1984—),男,河南平顶山人,法医师,工学学士,主要从事法医物证检验工作。Tel:18639256539;E-mail:gxtao2008@163.com

摘要

目的 利用Maxwell 16裂解纯化法从保存8年以上陈旧精斑检材中获取精子DNA。方法 8份陈旧精斑检材采用Maxwell 16裂解纯化法提取精子DNA,并采用Powerplex○R21试剂盒进行复合扩增,产物用AB3130型遗传分析仪检测,结果与常规方法进行对比。结果 成功获得8份陈旧精斑检材精子STR分型。结论 差异裂解配合Maxwell 16裂解在陈旧精斑检材精子DNA检验中效果明显。

关键词: 差异裂解; Chelex; Maxwell 16; DNA提取
中图分类号:DF795.2 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2014)05-0012-02
Application of Maxwell 16 in DNA extraction from old semen samples
GUO Xiao-tao, GUO Jian-wei, DU Yong, LI Yong, CHEN Xue-mei
Abstract

In this paper, DNA from 10 years old semen samples was extracted by using Maxwell 16 and the results were compared with conventional extraction methods. The study indicated that Maxwell 16 is effective for extracting DNA from old semen samples.

Keyword: Maxwell16; old semen; extraction: DNA

笔者对8份10年前的精斑检材进行检验和再检验, 采用常规差异裂解法提取未获得完整STR分型, 利用Maxwell裂解纯化法从陈旧精斑检材中成功获取了精子STR分型。

1 材料与方法
1.1 样 本

收集本实验室利用常规差异裂解法提取未获得或未获完整STR分型的陈旧精斑检材8份(均为女性内裤)。

1.2 仪器及试剂

3130型遗传分析仪(AB公司); 9700金座PCR扩增仪(AB公司); 480型基因扩增仪(珠海黑马); DNA IQTM Spin Baskets; Maxwell核酸提取仪(Promega公司); DNA IQTM Casework Pro Kit for Maxwell○R16; PK; SDS。

1.3 方 法

1.3.1 DNA提取 剪取各内裤上有可疑斑迹的部分约1cm× 1cm大小, 分别放入1.5mL离心管中, 加入1mL超纯水, 浸泡3min后高速振荡3s, 14000r/min离心6min后去掉上清液, 再加入1mL超纯水、60μ L PK、60μ L SDS, 混匀后37℃保温过夜。

取保温过夜后的离心管, 高速振荡3s, 将液体和载体一起转移到带DNA IQTM Spin Baskets的1.5mL离心管中, 14000r/min离心6min后倒掉上清液。加入1mL超纯水洗涤沉淀3次, 加入200μ L配好的Lisis buffler, 95℃保温1h, 14000r/min恒温离心6min, 转移200μ L上清至试剂条的裂解液中, 放入Maxwell 16核酸提取仪进行提取, 加入30μ L Elution buffler, 提取完成后的Elution buffler产物用于扩增反应。

1.3.2 PCR扩增与产物的检测 Maxwell 16核酸提取仪提取的产物采用Powerplex○R21试剂盒进行复合扩增, 扩增产物采用AB 3130型遗传分析仪电泳分析, 得到检验结果。

2 结果与讨论

常规的差异裂解法提取精斑检材适用于大多数女性细胞低于一定比例新鲜的检材, 笔者所采用的8份陈旧精斑检材均未获得完整的STR分型(见图1、图3), 而采用Maxwell 16核酸提取仪成功获得了Powerplex○R21试剂所包含的全部STR分型(见图2、图4), 并利用检验结果成功破获2起10年前的强奸杀人命案积案。

图1 山城2000年强奸杀人案STR分型图谱(常规)

图2 山城2000年强奸杀人案STR分型图谱(Maxwell 16)

图3 山城2002年强奸杀人案STR分型图谱(常规)

图4 山城2002年强奸杀人案STR分型图谱(Maxwell 16)

检验的8份检材, 均保存了10年以上, 利用常规差异裂解和CHELEX 100法结合提取不能很好的去除检材上的杂质, 也不能很好的对精子进行裂解和富集, 因此均未获得完整的STR分型。

而采用Maxwell 16核酸提取仪检验成功, 得益于检材的妥善保管和新的核酸提取仪的纯化技术。本次检验, 首先用超纯水对检材洗涤一次, 优先去除一部分女性物质, 避免了采用差异裂解法女性物质去除不彻底。Maxwell 16核酸提取仪和差异裂解配合DNA IQTM Casework Pro Kit for Maxwell○R16试剂, 利用DNA IQTM Casework Pro Kit配套的Lisis buffler对精子DNA进行更完全的裂解, 然后利用试剂条中的磁珠对裂解出的产物进行吸附, 依次用Lisis buffler、Washing buffer对磁珠和核酸的结合物进行洗涤, 在此过程中, 磁珠和核酸的结合物始终在加电枪头上进行转移, 大大提高洗涤效率, 减少洗涤过程中核酸的损失, 所以成功获得陈旧精斑检材的完整STR分型。本次实践证明, 差异裂解结合Maxwell 16核酸提取仪能够有效的从陈旧精斑检材中提取出精子DNA。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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