案例1 某年2月3日16时许, 一辆机动车前挡风玻璃被气枪打碎。技术员现场提取两个直径约0.5cm的钢珠, 送至DNA实验室。

案例2 某年6月13日13时许, 某地发生1起抢夺案。嫌疑人抢过受害人金项链后逃窜, 被抓获后, 剪取其10枚指甲进行DNA检验。

案例3 某年10月17日, 某小学教师办公室内电脑被盗。技术员在现场发现3粒桂圆核, 提取后送至DNA实验室。

在实际工作中, 对于体积较小、质地较硬的检材(比如果核、钢珠、指甲等), 一般都采用“ 两步擦拭法” 富集脱落细胞, 但笔者认为, 某些检材利用“ 震荡冲洗法” 比“ 两步擦拭法” 更能获得满意的分型结果, 主要原因如下:

(1) 优化操作步骤。在案例2中, 指甲末端内可能含有极少量的异体细胞, 希望提取时可以获得单一的异体细胞, 从而可以起到直接认定的作用。使用“ 两步擦拭法” 提取指甲末端的异体细胞时, 力度很难把握, 力度太轻或太重都会影响最终的检测结果, 而使用涡旋震荡冲洗法在一定程度上避免了力度难以控制的问题。

(2) 提高DNA含量。在案例1中, 检材是钢珠, 属于圆形物体, 利用棉签或棉线两步擦拭时, 难免会有遗漏之处, 从而降低了检材表面脱落细胞的提取量; 而利用“ 震荡冲洗法” 提取时, 消化液可以与钢珠表面充分接触, 在涡旋震荡下, 钢珠表面的脱落细胞可以被消化液充分冲洗掉, 并完全溶在消化液中, 最大程度上提高了DNA含量。

(3) 提高DNA纯度。DNA样品的纯度是影响DNA分型结果的因素之一^[4]。案例1和案例3中的检材均为圆形, 不易固定, 利用“ 两步擦拭法” 擦拭时易滚动, 有时甚至会从操作台上滚落到地上, 难免造成污染。案例2中的检材是指甲末端, 有时很窄, 擦拭时用眼科剪固定, 偶尔会发生迸溅现象, 难免也会污染。利用“ 震荡冲洗法” 在很大程度上避免了检材的污染, 极大的提高了DNA的纯度。

(4) 控制冲洗时间。震荡冲洗的时间长短主要取决于检材的属性。DNA含量低且非混合性的检材(如案例1中的钢珠), 可以适当延长震荡冲洗时间, 5S~10S为宜。时间过短, 检材上附着的DNA尚未完全冲洗下来, 导致DNA模板浓度较低; 时间过长, 大量金属离子会被冲洗下来, 影响DNA的扩增。DNA含量高的检材(如案例3中的桂圆核), 可以适当减少震荡冲洗时间, 以免浓度过多影响分型结果。含有大量自身细胞的混合性检材(如案例2中的指甲末端), 也应减少震荡冲洗时间, 不宜过长, 以免出现混合型结果。

当然, “ 震荡冲洗法” 也有局限性, 如果检材的体积比较大, 无法置入离心管中, 或质地比较松软, 涡旋震荡时, 大量载体自身的成分会混在DNA中, 抑制DNA的扩增或严重影响分型结果, 都不宜使用该方法提取。

总之, 在以后的法医DNA检验工作中, 针对某些体积小、质地硬的检材, “ 震荡冲洗法” 具有其独特性、可行性和优越性, 将发挥着更加重要的作用。