Identifier-plus试剂盒(LT公司)扩增后的图谱发现伪三等位基因(见图1)。而用AGCU Express mark 22试剂盒扩增, 未发现三等位基因。由于不同扩增试剂盒引物结合区序列不同, 结合不同试剂盒多次扩增可用于发现和纠正疑似三等位基因及无效等位基因。

图1

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	图1 伪三等位基因

等位基因丢失(见图2)可以发生于当模板DNA浓度过高, D3S1358基因座相应位置有等位基因时, 在D19S433基因座容易发生等位基因丢失。分析其原因可能是荧光染料之间的检测光谱重叠, 造成荧光检测信号在不同颜色之间相互干扰, 不同颜色荧光染料之间的光谱重叠在强度比例上是基本稳定的, 光谱校正时会自动消除相对强度比值的干扰信号^[3]。当模板DNA浓度过高, D3S1358基因座上等位基因峰信号过强, 造成D19S433基因座相应位置上的等位基因峰信号被作为“ 干扰信号” 部分消除。此外, 在vWA基因座也容易发生等位基因丢失。通过减量检测可获得正确的分型。

图2

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	图2 等位基因丢失

此外, 分析软件错误分析(见图3) 相差1个bp的等位基因, 也可由于模板浓度过高, 影响软件判读, 致分析出错。当发生这种情况, 可通过减量检测得到正确分型, 图3图谱中D7S820基因座的基因型应为10.1/11。

图3

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	图3 软件错误分析一

电极缓冲液和毛细管的使用次数过多时, 可导致电泳分辨率下降, 当电泳系统不能有效分辨时, 分析软件会把这两个基因峰识别为1个峰(见图4), 或出现OL峰(见图5)。

图4

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	图4 软件错误分析二

图5

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	图5 软件错误分析三

人员样本通过峰面积比例可以人工进行识别判断, 调整Genemapper分析软件中的Peak Window Size的数值, 即可达到区分判读(见图6)。但在混合分型中, 特别当两个样本DNA含量差异明显时, 会发生影响数据的判断, 即使调整Peak Window Size的数值或更换缓冲液及毛细管重新电泳, 也不能进行有效区分, 此时实验员的分析经验十分重要, 可通过峰形作出正确的判断。

图6

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	图6 调整软件数值后可区分判读

要得到可靠的STR图谱, 应选用合格的提取、扩增试剂, 实验方法要得到证实与确认, 通过检定和核查仪器等一系列环节来保证稳定的仪器运行状态。

对STR图谱正确分析需要检验人员要对理论知识有一定的掌握^[4] , 如扩增和电泳的原理、分析软件的工作原理等等。对峰形及峰高峰面积比例有一定的敏感性, 对峰形、峰面积比例异常的情况谨慎对待, 遇到OL峰要具体情况具体分析, 对微量DNA或模板DNA浓度过高的需要多次检验, 以得到最佳的分型图谱。现有的分析软件具备强大的数据处理功能, 有待检验人员掌握功能, 充分运用。