引用本文
郝金萍, 邵丽芳, 陈松, 刘开会, 郭燕霞. 两种方法提取汗潜手印DNA的比较研究[J]. 刑事技术,2013,0(4): 34-35
HAO Jin-ping, SHAO Li-fang, CHEN Song, et al. The comparison of two methods for extracting DNA from sweat latent fingerprints[J]. Forensic Science and Technology,2013,0(4): 34-35  
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两种方法提取汗潜手印DNA的比较研究
郝金萍1, 邵丽芳2, 陈松1, 刘开会1, 郭燕霞1
1.公安部物证鉴定中心,北京 100038
2.北京市公安局刑侦总队七支队,北京 100054

作者简介:郝金萍(1978—),女,山西太原人,主检法医师,硕士学位,主要从事法医物证案件检验及科学研究工作。Tel:010-66269472; E-mail:hao-haoaho@163.com

摘要

目的比较M48 和DNeasy® plant Mini两种方法提取汗潜手印DNA的优劣。方法用M48和DNeasy® plant Mini两种方法分别提取16对汗潜手印DNA,并进行DNA定量,比较定量结果。结果M48法明显比plant Mini法提取到的DNA量多(配对 t检验:α=0.05, t=3.45,γ=15,0.002< p<0.005)。结论M48法提取汗潜手印DNA优于plant Mini法。

关键词: 法庭科学; 汗潜手印; DNA提取
中图分类号:DF795.2 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2013)04-0034-02
The comparison of two methods for extracting DNA from sweat latent fingerprints
HAO Jin-ping, SHAO Li-fang, CHEN Song, et al
Institute of Forensic Science, Ministry of Public Security, Beijing 100038, China
Abstract

Objective To compare QIAGEN MagAttract® DNA Mini M48 kit and DNeasy® plant Mini kit in DNA extraction from sweat fingerprints.Methods DNA on 16 pairs of fingerprints was extracted using QIAGEN MagAttract® DNA Mini M48 kit and DNeasy® plant Mini kit respectively, and then the extract was analyzed.Results A significant increase in DNA recovery was noted by using QIAGEN MagAttract® DNA Mini M48 kit as compared to DNeasy® plant Mini kit (pared t-test:α=0.05, t=3.45,γ=15,0.002< p<0.005).Conclusion The QIAGEN MagAttract® DNA Mini M48 kit was more effective for DNA recovery from sweat latent fingerprints compared with the DNeasy® plant Mini kit.

Keyword: forensic science; sweat latent fingerprints; DNA extraction

手印物质中存在脱落上皮细胞, 有可能留下核DNA[1]。手印DNA多数为低拷贝模板(LCN), 因此其提取难度较大[2]。虽然已有汗潜手印DNA提取方法的研究报道[3], 但是研究的提取方法为C-有-柱法、SiO2法, 并未涉及目前常用到的磁珠法。

本文初步比较了QIAGEN MagAttract® DNA Mini M48 和DNeasy® plant Mini两种方法提取牛皮纸上的汗潜手印, 为今后在案件中遇到此类检材时, 在选择提取方法上能有所依据。

1 样本制备

16对手印样本为左右手大拇指在牛皮纸上的指定位置(3cm× 4cm)对称捺印, 捺印时间为30s, 捺印力度控制在1500g左右。

2 DNA提取

QIAGEN MagAttract® DNA Mini M48 法提取DNA参见参考文献[4]。DNeasy® plant Mini法提取DNA操作如下:

(1) 用剪刀将纸张上的手印部位剪取下来并剪碎置于1.5mL的离心管中; 加入400μ L缓冲液AP1和4μ L RNase A(100mg/mL), 涡旋震荡, 65℃温浴10min, 在温浴过程中上下倒置试管混合2~3次;

(2) 加入130μ L缓冲液AP2, 混合, 在冰上放置5min;

(3) 2000× g(14000 r/min)离心5min。将裂解物置于QIAshredder Mini Spin柱中, 下置2mL收集管, 2000× g(14000 r/min)离心2min;

(4) 将步骤(3)中的滤液转移到一新的试管中;

(5) 在溶解清液中加入1.5倍体积的缓冲液AP3/E, 混匀;

(6) 将步骤(5)中650μ L混合液加入DNeasy Mini Spin Column柱, 下置试剂盒提供的2mL 收集管。在≥ 6000g(≥ 8000r/min)下离心1min, 丢弃滤液;

(7) 用剩余的混合液, 重复步骤(6), 丢弃滤液与收集管;

(8) 将DNeasy Mini Spin Column柱放置于试剂盒提供的2mL收集管上, 加入500μ L缓冲液AW, 在≥ 6000g(≥ 8000r/min)下离心1min, 丢弃滤液;

(9) 在DNeasy Mini Spin Column柱中加入500μ L缓冲液AW, 在≥ 2000g(14000r/min)离心2min, 使膜干燥;

(10) 将DNeasy Mini Spin Column柱下置1.5mL离心管, 吸取50μ L缓冲液AW加到DNeasy膜上。室温(15℃~25℃)下5min, 在≥ 6000g(≥ 8000r/min)离心1min洗提DNA。

DNA定量参见文献[4] 。

3 结果与讨论

16对样本分别用MagAttract® DNA Mini M48 法和DNeasy® plant Mini法提取后的定量结果进行整理, 如图1所示。经统计学分析, M48法明显比plant Mini法提取到的DNA量多(配对t检验:

α =0.05, t=3.45, γ =15, 0.002< p< 0.005)。用M48法提取到的手印DNA量平均为0.13ng/μ L, 是DNeasy® plant Mini法提取手印DNA量的(0.01ng/μ L)10倍。

图1 M48法和plant Mini法提取手印DNA定量结果比较

QIAGEN公司的MagAttract® M48磁珠法提取DNA是利用具有磁性的硅珠的方法, 将DNA吸附在硅珠表面, 再通过具有磁性的介质将吸附有DNA的硅珠与裂解液中的杂质、碎片等分离, 从而达到提取、并纯化DNA的目的。而DNeasy® plant Mini试剂盒是利用过滤柱的原理, DNA与柱子中的膜结合, 再用洗脱液将DNA洗脱、收集, 从而提取、纯化DNA。

本研究中, 比较了上述两种方法提取纸张上手印DNA的优劣, 结果证实MagAttract® M48磁珠法提取的效率高于DNeasy® plant Mini方法, 这与Jonathan Sewell等学者的研究结果相悖。Jonathan Sewell认为[5], DNeasy® plant Mini试剂盒更适合提取纸张上的DNA, 因为该试剂盒中的裂解液含有纤维素酶, 可以裂解纸张中的纤维素, 使附着于纤维上的DNA得到释放。本研究结果相反, 可能因为汗潜手印的DNA粘附在纸张表面, 并没有渗透进去, 所以plant Mini试剂盒可以裂解纸张中的纤维素意义不大。

汗潜手印中含有的有核细胞数很少, 因此并非从每枚汗潜手印中都能提取到DNA, 尽管已有研究证明[6]:即使是一次手指皮肤的触碰, 也转移了足够量的DNA以供基因分析, 即便能够提取到, 手印间提取到的DNA量也表现出较大的差异, Federica Alessandrini等人认为, 汗潜手印中提取到的DNA量的大小具有随机性, 并无确定的科学规律, 但主要与两个因素有关:一是捺印个体手上皮肤脱落细胞的易脱落度及其质量; 二是DNA提取方法的选择。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 王传海, 常彩琴, 刘开会, 等. 指印生物遗传标记检验的研究现状与展望[J]. 刑事技术, 2002(2): 36-38. [本文引用:1]
[2] 陈松, 胡兰. 低拷贝模板STR分型及其存在的问题[J]. 中国法医学杂志, 2003, 18(5): 314-316. [本文引用:1]
[3] 刘开会, 王传海, 周静, 等. 汗潜指印DNA提取方法的初步研究[J]. 刑事技术, 2002(3): 12-13. [本文引用:1]
[4] 邵丽芳, 郝金萍, 常柏年, 等. 短波紫外照射对汗潜手印DNA检测的影响初探[J]. 刑事技术, 2012(1): 24-26. [本文引用:2]
[5] Jonathan S, Ignacio Q, Carole A, et al. Recovery of DNA and fingerprints from touched documents[J]. Forensic Science International: Genetics, 2008(2): 281-285. [本文引用:1]
[6] Federica A, Monia C, Mauro P, et al. Fingerprints as evidence for a genetic profile: morphological study on fingerprints and analysis of exogenous and individual factors affecting DNA typing[J]. Forensic Sci, 2003, 48(3): 345-356. [本文引用:1]