引用本文
刘明明, 薛锦锋, 田琳琳. 异烟酸-吡唑啉酮色阶法分析生物检材样品中的氰化物[J]. 刑事技术,2013,38(1): 44-45
LIU Ming-ming, XUE Jin-feng, TIAN Lin-lin. Analysis of the Cyanide in biological samples by Iso-nicotinic Acid-pyrazdone color class method[J]. Forensic Science and Technology,2013,38(1): 44-45  
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异烟酸-吡唑啉酮色阶法分析生物检材样品中的氰化物
刘明明, 薛锦锋, 田琳琳
浙江省嘉兴市公安局刑科所,314000

作者简介:刘明明(1980—),男,辽宁沈阳人,助理工程师,本科,从事毒物、毒品检验工作。Tel:0573-82083070转7082;E-mail:liusir0245@126.com

摘要

目的建立生物检材样品中氰化物定性半定量法——异烟酸-吡唑啉酮色阶法,以适应基层工作的需要。方法采用蒸馏法完成生物检材样品的净化、提取,吸收液中的氰化物在中性pH6.8~pH7.0溶液中,与氯胺T作用生成氯化氰。再与异烟酸-吡啉唑酮作用生成蓝色络合物。结果通过目视比较样品管与标准色阶管的颜色,可判断样品中氰化物的含量范围。结论本方法易操作、抗干扰性强、适合基层实验室参考使用。

关键词: 氰化物; 异烟酸-吡唑啉酮; 色阶法
中图分类号:DF795.1 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2013)01-0044-02
Analysis of the Cyanide in biological samples by Iso-nicotinic Acid-pyrazdone color class method
LIU Ming-ming, XUE Jin-feng, TIAN Lin-lin
Crime Investigation Department, Public Security Bureau of Jiaxing, Zhejiang Province 314000, China
Abstract

Objective To establish a method for analysis of Cyanide in biological samples by Iso-nicotinic Acid-pyrazdone color class method.Methods The Cyanide was extracted by steam distillation. In the buffer solution at pH6.8-7.0, the Cyanide reacts with chloramine-t forming Chlorocyanogen, and then the Chlorocyanogen reacts with Iso-nicotinic and Acid-pyrazdone to form a stable blue complex.Results The content range of Cyanide was estimate by compared the color class of standards and samples.Conclusion This method is simple and accurate and can used for analysis of Cyanide in biological samples.

Keyword: Cyanide; Iso-nicotinicAcid-pyrazdone; color class method

氰化物是一种剧毒物, 氰化钾、氰化钠被广泛的应用于冶金、电镀、化工等生产中[1], 民间也常将其用于猎杀禽兽, 该药在农村中极易得到, 故此类投毒或自杀案件时有发生。对于氰化物检测的研究也从未停止, 但主要集中在气相色谱法、气相色谱-质谱联用法等[2, 3, 4], 这些方法对仪器设备有较高的要求。本文通过对异烟酸-吡唑啉酮色阶法的研究, 在不使用高端仪器设备条件下, 也能实现生物检材样品中氰化物快速定性及半定量, 适合基层实验室参考使用。

1 材料与方法
1.1 仪器和试剂

全玻璃蒸馏器、比色管。

1%氢氧化钠、10%乙酸锌、0.05%甲基橙指示剂、15%酒石酸溶液、1%氯胺T、磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)、异烟酸-吡唑啉酮溶液、氰化物标准系列溶液。

1.2 试剂配制

(1)磷酸盐缓冲溶液(pH7.0):34.0g磷酸二氢钾和35.5g磷酸氢二钠溶于蒸馏水中, 定容至1000mL。

(2)异烟酸-吡唑啉酮溶液:1.5g异烟酸溶于24mL 2%氢氧化钠溶液中, 低温加热溶解, 稀释至100mL。另取吡唑啉酮0.25g溶解于20mL N-二甲基甲酰胺中, 使用时将异烟酸与吡唑啉酮按体积比5∶ 1混匀。

(3)氰化物标准系列:称取0.25g氰化钾溶于水中并稀释至1000mL, 此液每mL相当于0.1mg氰化物, 临用前用1g/L氢氧化钠溶液稀释为每mL相当于0.1μ g氰化物。

1.3 方 法

吸取2.0mL血样或0.5g肝脏匀浆, 加入适量纯水, 置于500mL全玻璃蒸馏器中, 加入数滴甲基橙指示剂, 再加入5mL乙酸锌溶液, 加入1g酒石酸, 蒸馏, 以5mL氢氧化钠溶液为吸收液收集馏出液, 备用。取0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00、9.00、10.00μ g氰化物标准系列管, 向标准管、样品管各加5.0mL磷酸盐缓冲溶液。置于恒温水浴中, 加入0.50mL氯胺T溶液, 加塞放置5min, 然后加入5.0mL异烟酸-吡唑啉酮溶液, 加水至50mL, 混匀, 放置30min后, 目视比色。

2 结果与讨论
2.1 缓冲液pH的选择

对不同pH缓冲溶液体系中的氰化物标准系列的测定, 发现pH6.8~pH7.0标准系列具有较好的色阶及稳定性, 故选择缓冲溶液体系为pH6.8~pH7.0。

2.2 显色温度及时间

由于氰化物与氯胺T反应生成极活泼的氯化氰(沸点13.1℃), 氯化氰再与异烟酸-吡唑啉酮作用。分别选取了0.5、4.0、8.0μ g 3支标准管, 在不同温度、时间下观察各标准管颜色, 发现在37℃水浴下, 放置30min后, 标准管颜色趋于稳定, 因此, 选择测定在37℃水浴中放置30min后测定。

2.3 灵敏度试验

异烟酸-吡唑啉酮法是经典的氰化物分析法, 多种样品的国标法均采用此法。事实上此法的灵敏度较高, 最低检测质量可达到0.10μ g。本文采用0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00、9.00、10.00μ g氰化物标准系列, 其颜色随着氰化物含量的增加, 形成一个由浅至深的蓝色标准色阶。此法显色稳定时间长, 通过比较样品管与标准色阶管的颜色, 可判断氰化物的含量范围。

2.4 精密度试验

用高、中、低不同浓度的氰化物标准溶液测定10次, 其颜色完全一致(见表1), 因此, 在实际生物检材的样品的测定时, 既可采用标准色阶系列管、也可用限量管进行半定量。

表1 精密度试验
2.5 准确度试验

在不含氰化物的血液、肝脏匀浆中分别加入0.5、6.5μ g的氰化物标准用色阶法与分光光度法同时测定, 两法检测结果相符, 具有较好的准确度(见表2)。

表2 准确度试验
2.6 干扰试验

用各种浓度的氰化物标准溶液加入到不同的血液、肝脏匀浆样品中, 再分别加入不同浓度的硫化物、醛类等可能干扰物, 显色后于未加干扰物组比对, 无明显差别。

本文采用异烟酸-吡唑啉酮色阶法检测生物检材样品中氰化物, 此法操作简便, 且比较直观, 能满足基层机构对生物检材样品中氰化物定性、定量快速检测的需要。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 李云鹏. 血液中氰化物检测研究进展[J]. 国际检验医学杂志, 2007, 28(5): 457-461. [本文引用:1]
[2] 封世珍, 于忠山, 王芳琳, 等. HS/GC/ECD分析生物检材样品中的氰化物[J]. 中国法医学杂志, 2002, 17(4): 228-230. [本文引用:1]
[3] 魏万里. GC-MS/MS法检验生物材料中的无机氰化物[J]. 刑事技术, 2009(6): 31-34. [本文引用:1]
[4] 乔静. GC/MS法用于检材氰化物1例[J]. 中国法医学杂志, 2011, 26(1): 72-73. [本文引用:1]