引用本文
苑美青, 周毅, 石屹, 韦方年, 李彩霞, 李万水. 强奸致孕形成部分性葡萄胎的检验分析[J]. 刑事技术,2012,37(5): 9-11
YUAN Mei-qing, ZHOU Yi, SHI Yi, WEI Fang-nian, LI Cai-xia, LI Wan-shui. Genetic analysis of the partial hydatidiform mole in a rape case[J]. Forensic Science and Technology,2012,37(5): 9-11  
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强奸致孕形成部分性葡萄胎的检验分析
苑美青1,2, 周毅1,2, 石屹1,2, 韦方年3, 李彩霞1,2, 李万水1,2
1.公安部物证鉴定中心
2.法医学公安部重点实验室,北京 100038
3. 广西大化县公安局,530800

作者简介:苑美青(1977—),女,山西省应县人,主检法医师,博士,主要从事法医遗传学检案和研究工作。E-mail:yuanmeiqing000@yahoo.com.cn

摘要

目的 探讨强奸致孕案葡萄胎组织的DNA检验和STR结果分析。方法 用DNA TyperTM15试剂盒对犯罪嫌疑人、受害人血样和流产胚胎组织进行荧光复合STR基因座扩增检测。结果 检测的一例流产胚胎组织DNA的STR峰谱表现出部分3条带,且3条带中有两个等位基因来源于犯罪嫌疑人,另外一个来源于受害人,推断为单卵双精子受精的部分性葡萄胎。结论 应用STR分型技术可以推断葡萄胎的DNA来源和受精类型,为亲缘关系鉴定提供依据。

关键词: 强奸案; 葡萄胎; STR
中图分类号:DF795.2 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2012)05-0009-03
Genetic analysis of the partial hydatidiform mole in a rape case
YUAN Mei-qing, ZHOU Yi, SHI Yi, WEI Fang-nian, LI Cai-xia, LI Wan-shui
Institute of Forensic Sciences, Ministry of Public Security, Beijing 100038,China
Abstract

Objective To discuss the result of DNA typing for a partial hydatidiform mole sample in a rape case.Methods An abortus tissue sample and the blood samples of the suspect and victim were analyzed by multiple STR typing with DNA TyperTM 15 kit.Results The STR genotype of this abortus tissue sample showed three peaks of which two comes from the suspect and the other comes from the victim. The result suggested that it's a partial hydatidiform mole which DNA comes from one egg and two sperms.Conclusion There are different hydatidiform moles that STR genotyping could determine the DNA resource and fertilization types. The STR genotyping results could also provide the proof of paternity testing and criminal case inquisition.

Keyword: rape case; hydatidiform mole; STR

葡萄胎(Hydatidiform mole, HM)也称水泡状胎块, 是指妊娠后绒毛滋养细胞增生, 绒毛间质水肿, 呈水泡状, 水泡间相连成串, 形如葡萄而得名[1]。葡萄胎是一种良性滋养层细胞肿瘤, 在组织学上可分为完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole, CHM)和部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole, PHM)两类。实际临床中多数葡萄胎为完全性葡萄胎, 恶变率较高, 少数为部分性葡萄胎, 罕见恶变。

本文利用STR复合扩增技术对一例因强奸致孕的流产组织进行了检验, 获得了一种典型的三倍体DNA分型, 这在国内法医界尚未见报道。

1 葡萄胎的受精类型和病理学特点
1.1 葡萄胎的受精类型

完全性葡萄胎染色体来源于父方, 或称为雄核发育。其受精类型主要有:(1)空卵单精子受精:由一个空卵(无基因物质卵)与一个单倍体精子(23, X)受精, 经自身复制恢复为二倍体(46, XX), 再生长发育而成。其STR的峰谱特征是所有等位基因都是纯合子, 表现为单峰。(2)空卵双精子受精:核型为46, XY, 是两个性染色体不同的精子(23, X及23, Y)同时着空卵受精而成。这种受精类型的某些位点会出现两条等位基因。部分性葡萄胎则包含父母双方的DNA物质, 其受精类型主要是单卵双精子受精, 其核型常是三倍体, 其中80%为69、XXY, 其余是69、XXX或69、XYY, 由此带来一套多余的父方染色体成份[2]。其STR基因座为三倍体基因型, 可见3个等位基因或峰高比为2:1的两个等位基因[3]。

1.2 葡萄胎的病理学特点

完全性葡萄胎的病理特点是绒毛普遍水肿形成水泡, 无胚胎及胎膜, 见不到有核红细胞, 细胞滋养细胞和合体滋养细胞均有较重程度的增生。部分性葡萄胎是仅见散在的水泡, 仍有正常绒毛或胎儿成分, 细胞增生呈局灶性, 程度较轻[4]。

2 案件简介

某年1月, 河南省某市肖某(14岁)被王某强奸致孕, 受害人怀孕6周后在医院采用吸宫术流产绒毛组织一份, 送本实验室检验, 样品为碎片型组织, 肉眼未见绒毛水肿、水泡等明显葡萄胎表观特征。

3 检验方法
3.1 DNA提取

用常规Chelex-100法分别提取犯罪嫌疑人、受害人血样DNA。另取流产组织放入生理盐水中, 浸泡后反复冲洗掉血污, 用镊子夹住漂浮的絮状组织, 剪取长约1mm组织块, 放入0.5mL 离心管中, 水洗1次, 离心去上清, 加入200μ L 5% Chelex-100溶液, 56℃保温30min, 99℃变性10min, 离心取上清进行PCR扩增。

3.2 STR复合扩增和检测

采用DNA TyperTM15扩增试剂盒进行荧光复合STR基因座扩增, 扩增产物用ABI3100遗传分析仪检测, 经Genemapper V3.2.1软件进行分析, 获得受害人、犯罪嫌疑人及流产组织的STR分型, 结果见表1所示。

表1 受害人、犯罪嫌疑人及胚胎组织的STR分型结果
3.3 葡萄胎的亲缘关系计算

参考巴华杰[2]、杨庆恩等[5]关于部分性葡萄胎为三倍体, 其父方是母方的2倍, 其中母亲是确定的, 进行亲缘关系鉴定时, 把来自父亲的2个等位基因作为一个整体进行计算。

PI=0.5pq当父亲基因型为AB时1p2当父亲基因型为AA时

其中p、q分别为等位基因A和B的频率; 分别计算14个STR位点的父权指数(paternity index, PI), 最后得出联合父权指数CPI值 CPI=∏i=1nPIi和亲子关系相对机会(relative chance of paternity, RCP) RCP=CPICPI+1×100%。

4 结果与讨论

从图1可以看出, 流产组织的STR峰谱出现部分3条带现象(见图1), 并且和父母双方的基因型相吻合, 且3个等位基因座的峰高相同或相近, 而其余出现两个等位基因峰的, 峰高比也符合来自父方的等位基因峰高是来自母方的等位基因峰高的2倍。说明该流产组织是三倍体, 出现3条带的基因座其中有两个等位基因来源于嫌疑父亲, 判断应为单卵双精子的典型遗传学部分性葡萄胎。

图1 流产胚胎组织的STR峰型图

确定该葡萄胎的受精类型后, 参考相应的部分性葡萄胎亲缘关系鉴定方法, 根据嫌疑父亲14个STR基因座的基因频率(参考2011年公安部物证鉴定中心DNA TyperTM15试剂盒使用说明书), 计算出嫌疑父亲的CPI值为8.9× 1020, 亲子关系相对机会RCP为99.999999%。

目前多位点STR复合扩增技术可以确定葡萄胎的受精类型, 进而为临床诊断和治疗或为预测和分析恶变的可能性提供依据。张小为等[6]用9个位点的复合STR扩增, 对54例葡萄胎样本进行分析, 区分出受精类型。孙佳良等[7]利用激光捕获显微切割技术提取到126例葡萄胎蜡块组织中的DNA, 并进行16个位点的STR复合扩增, 确定了全部126例葡萄胎的受精类型。

部分性葡萄胎几乎都是单倍体卵子双精子受精所致[8]。葡萄胎最重要的问题就是它有可能发展为侵袭性病变甚至绒癌。文献报道侵袭性葡萄胎主要来自于完全性葡萄胎, 罕见来自于部分性葡萄胎。遗传物质来自于双亲的恶变及其罕见, 甚至无恶变发生。这也是葡萄胎越早检测, 越早发现, 越早治疗来避免患者进一步恶变发生的意义所在。

目前在强奸案中报道的葡萄胎案例较少, 凃政等[4]和靖静等[9]分别报道了一例空卵单精子受精形成的完全性葡萄胎。国内尚未有强奸致孕形成部分性葡萄胎的案例报道。这与葡萄胎的发生率有关。葡萄胎的发生率不同国家与地区报道的差异较大, 我国流行病学调查发现, 1991年至2000年360余万次妊娠中, 妊娠滋养细胞疾病(gestational trophoblastic disease, GTD)的发病率为0.387%, 其中HM占64.16%, 而HM中CHM占77.10%, PHM占23.10%[10]。据此计算形成本案例部分性葡萄胎的可能性仅为0.05735%, 发生概率是极低的。同时葡萄胎的发生与营养状况、社会经济及年龄相关。年龄大于40岁或小于20岁均是葡萄胎发生的高危因素, 这两个年龄段的妇女易有受精缺陷。本案受害人年龄仅14岁, 这也可能是形成此例葡萄胎的原因之一。

由于葡萄胎的基因分型不同于正常胎儿, 所以如何对此类检材进行亲缘鉴定有一定的困难。巴华杰等[2]报道了几种不同葡萄胎的亲缘关系鉴定的计算方法。但前提是需要明确葡萄胎的受精类型, 可见利用STR分型技术首先明确葡萄胎的受精类型是进行亲缘关系鉴定的前提。本案送检样本为碎片型组织, 肉眼并未判断出其为葡萄胎, 同时对流产组织很难准确区分胚胎组织和母体蜕膜组织, 笔者进行了多次检验, 才最终确定了流产组织的STR分型, 所以在实际检案中如遇到流产组织DNA分型特殊, 应引起注意, 建议要多次试验, 确保试验结果的准确可靠。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 李秀丽, 杨玉斌, 李慧林. 7周~8周早孕期葡萄胎6例诊疗分析[J]. 基层医学论坛, 2009, 13(8): 727-728. [本文引用:1]
[2] 巴华杰, 邵岗, 董玉贞, 等. 葡萄胎的亲缘关系鉴定[J]. 中国法医学杂志, 2011, 26(3): 258-260. [本文引用:3]
[3] 杨秀玉. 滋养细胞疾病病因研究进展[J]. 中国实用妇科与产科杂志, 2001, 17(11): 645-646. [本文引用:1]
[4] 凃政, 宣艳华, 李澎, 等. 葡萄胎的DNA检验[J]. 刑事技术, 2007, (1): 12-13. [本文引用:2]
[5] 杨庆恩. 亲子鉴定DNA分型亲权指数的简经计算法[J]. 中国法医学杂志, 1998, 13(2): 90-92. [本文引用:1]
[6] 张小为, 朱浩彬, 高雅琴, 等. 葡萄胎的受精类型与恶变的关系[J]. 北京大学学报(医学版), 2004, 36(2): 215-217. [本文引用:1]
[7] 孙佳良, 朱艳, 张小为. 葡萄胎受精类型与恶变的关系探讨[J]. 山东医药, 2012, 52(6): 8-10. [本文引用:1]
[8] Genest DR. Partial hydatidiform mole: clinicopathological features, differential diagnosis, ploidy and molecular studies, and gold stand ards for diagnosis[J]. Int J Gynecol Pathol, 2001, 20: 315-322. [本文引用:1]
[9] 靖静, 巴华杰, 孟军, 等. 强奸致葡萄胎亲子鉴定1例[J]. 中国法医学杂志, 2007, 22(6): 418-419. [本文引用:1]
[10] 王静, 武淑英, 张小为. 葡萄胎遗传学研究进展[J]. 北京大学学报(医学版), 2006, 38(5): 548-550. [本文引用:1]