引用本文
张蕾萍, 舒翠霞, 杜鸿雁. 气相色谱-负化学源质谱法检测生物样品中佐匹克隆[J]. 刑事技术,2012,37(4): 17-18
ZHANG Lei-ping, SHU Cui-xia, DU Hong-yan. Determination of zolpiclone in biology samples by gas chromatography-negative ion chemical ionization mass spectrometry[J]. Forensic Science and Technology,2012,37(4): 17-18  
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气相色谱-负化学源质谱法检测生物样品中佐匹克隆
张蕾萍1, 舒翠霞2, 杜鸿雁1
1.公安部物证鉴定中心,北京 100038
2.中国医科大学,辽宁沈阳 110001

作者简介:张蕾萍(1974—),女,山西省人,硕士,助理研究员,主要从事毒物分析工作。Tel:010-66269494;E-mail:zlpbjft@sohu.com

基金: 中央公益性基金项目(No.2010JB001)
摘要

目的 建立气相色谱-负化学源质谱检验生物样品中佐匹克隆的方法。方法 采用Oasis HLB柱进行固相萃取,NCI-GC/MS检验。结果 生物样品中佐匹克隆平均萃取回收率达75.8%,最低检出限0.01μg·mL-1,线性良好,相关系数R2=0.9989。结论 该方法操作简便快速,提取回收率高,重现性好,提取物干净,可用于实际案件。

关键词: 法医毒物分析; 佐匹克隆; 气相色谱-质谱; 负化学源
中图分类号:DF795.1 文献标志码:A 文章编号:1008-3650(2012)04-0017-02
Determination of zolpiclone in biology samples by gas chromatography-negative ion chemical ionization mass spectrometry
ZHANG Lei-ping, SHU Cui-xia, DU Hong-yan
Institute of Forensic Science, Ministry of Public Security, Beijing 100038,China
Abstract

Objective To develop a method for determination of zolpiclone in biology samples.Methods The samples were extracted by using Oasis HLB solid phase extraction column, and analyzed by gas chromatography-negative ion chemical ionization mass spectrometry.Results The mean recovery rate of zolpiclone in biology samples was 75.8%, the limits of detection was 0.01 μg·mL-1, and the linear correlation coefficient was 0.9989.Conclusion The method is easy to operation, reliable and can be used in the casework.

Keyword: forensic toxicological analysis; zolpiclone; gas chromatography-mass spectrometry; negative ion chemical ionization

佐匹克隆, 是近年来临床常用的一种新型非苯二氮卓类催眠药物, 催眠效果好, 起效快, 代谢快。随着该药在临床上的应用增多, 它也逐渐出现在法庭科学和毒物检测领域[1]。为解决该药物在生物样品中的分离鉴定问题, 达到准确定性定量的目的, 本文对其进行了检测方法的研究, 建立了生物样品中负化学源-气质检验方法, 灵敏度高, 检出限低, 可以供相关分析工作者参考。

1 材料和方法
1.1 仪 器

Shimadzu QP2010型GC/NCI-MS, 均配以AOC-20i自动进样器(日本岛津公司)。EYELA CΜ TE MIXER CM100高速振荡器、Thero高速离心机、DSY-Ⅱ 快速浓缩仪。

1.2 试 剂

佐匹克隆标准品购于中国药检所。精确称取10.0mg标准品溶于10.0mL甲醇溶液中, 配成1.0mg· mL-1储备液置于冰箱中冷藏保存。临用时将储备液逐级稀释成0.1、0.01、0.001mg· mL-1佐匹克隆工作液。pH7.4磷酸缓冲液、甲醇、无水乙醇和二氯甲烷均为分析纯。Oasis固相萃取小柱(HLB 3CC/60mg), 购于美国Waters公司。空白全血(经肝素抗凝)采自健康志愿者。空白猪肝购至超市。

1.3 色谱条件

色谱柱:DB-5MS弹性毛细管柱 30m× 0.25mm× 0.25μ m。

进样口温280℃, 传输线温230℃, 离子源温200℃, 流量0.8mL/min, 分流比5 ∶1, 载气He气, 柱温程序240℃保持1min后, 以10℃/min升温至290℃保持20min, 离子源NCI, 质量扫描范围40~600amu, 扫描方式SCAN。

1.4 样品制备

取血液1.0mL, 加入pH7.4磷酸缓冲液3mL; 或取剪碎的肝组织1.0g, 加入pH7.4磷酸缓冲液8mL。将以上样品振荡混匀, 8000r/min离心30min。Water HLB(3cc/60mg)小柱依次经3mL甲醇, 3mL去离子水活化。取离心好的样品上清液过柱, 然后用 3mL去离子水和3mL 0.5%氨水-40%甲醇水淋洗小柱, 抽真空20min, 用4mL二氯甲烷洗脱小柱。洗脱液置于50℃快速浓缩仪上挥干。挥干后加入100μ L无水乙醇定容, 供仪器分析。

2 结 果
2.1 专属性

在选定的仪器条件下, 佐匹克隆具有良好的色谱峰, 在该色谱条件下分析生物样品无干扰(见图1), 表明该方法具有较好专属性, 佐匹克隆保留时间为5.1min(见图1), 特征离子为276(见图2)。

图1 佐匹克隆的总离子流图

图2 佐匹克隆的质谱图

2.2 标准曲线

用标准储备液稀释成0.05、0.1、0.5、1、5、10、20ng· μ L-1的佐匹克隆系列标准液, 各取1μ L, 供GC/MS分析。以标准溶液浓度为横坐标, 色谱峰面积为纵坐标做标准线性回归。曲线回归方程为Y=57351X+162.6, R2=0.9995。线性范围是0.05ng· μ L-1~20ng· μ L-1, 灵敏度是0.05ng· μ L-1。

2.3 萃取回收率

取空白全血1.0mL或空白肝1.0g, 分别添加系列标准液, 配制成高、中、低3种浓度(2、0.5、0.05μ g· mL-1)的血样, 每个浓度进行3个样本重复。按固相萃取方法萃取, 经GC/MS分析, 所得峰面积与相应标准的峰面积进行比较, 计算方法的萃取回收率。血样中3种浓度的回收率分别为(79.4± 3.5)%、(85.7± 4.3)%、(72.5± 5.6)%。肝组织中3种浓度的回收率分别为(72.4± 4.8)%、(80.5± 3.6)%、(64.5± 5.2)%。生物样品中平均回收率为75.8%。

2.4 工作曲线

取空白血1mL, 分别添加0.03μ g、0.1μ g、0.5μ g、1μ g、2μ g佐匹克隆系列标准, 涡旋10s, 充分混匀; 按样品萃取方法进行提取, GC/MS分析。以佐匹克隆浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标做线性回归, 得佐匹克隆回归方程为Y=422842 X-1833.5, 相关系数R2=0.9989。表明佐匹克隆浓度在0.03μ g· mL-1~2μ g· mL-1内呈良好线性。最低检出限(S/N=3)是0.01μ g· mL-1, 定量检测下限(S/N=10)0.03μ g· mL-1。

图3 佐匹克隆的工作曲线

3 讨 论

本文选用气质联用负化学源检测器分析生物样品中佐匹克隆, 可以检测到低浓度佐匹克隆。由于该药物结构中含有一个氯基团, 因此不仅适于气质联用电子轰击源分析, 也适于气质联用负化学源分析。本研究对这两种检测器进行了比较, 结果显示佐匹克隆在电子轰击源上的检出限是0.2μ g· mL-1, 而负化学源上的检出限是0.03μ g· mL-1。另外, 在色谱图中减少杂质干扰方面负化学源检测器也占有较大的优势。因此负化学源在以上两个方面均优于电子轰击源。

综上所述, 本研究建立的佐匹克隆气质联用负化学源检测法不但能够满足中毒量佐匹克隆的提取检验问题, 而且可检出治疗量的血药峰浓度[2](0.064~0.086μ g· mL-1), 从而为本行业中该毒物的检测提供了较好的参考方法。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 张润生. 四种催眠药物的GC/MSD检验[J]. 法医学杂志, 2004, 20(2): 98-99. [本文引用:1]
[2] 张蕾萍, 于忠山, 何毅, 等. 法庭科学中的新型催眠药[J]. 刑事技术, 2008(5): 37-40. [本文引用:1]