批量提取微量DNA在案件检验鉴定中的应用3例
冯燕
南京市公安局,江苏省 210012
关键词: 批量提取; 微量生物检材; DNA; 检验
中图分类号:DF795.2 文献标志码:B 文章编号:1008-3650(2012)02-0066-02

随着DNA检验灵敏度的提高, 越来越多的案件需进行微量生物检材DNA的检验, 本实验室应用96孔板批量提取微量生物检材DNA, 大大提高了检案效率, 在案件中发挥了重要作用。现介绍如下:

1 方 法
1.1 DNA提取

取细轴棉棒用TES浸湿棉棒上棉签后擦拭送检物品(如绳索、胶带、打火机、螺丝刀等)上可能有脱落上皮细胞的部位, 剪取棉签表面约0.5cm× 0.3cm大小依次放入96孔板中, 每孔中加入70μ L TES、10μ L 10%十二烷基肌氨酸钠及2μ L 10mg/mL PK, 56℃消化20min后99℃煮沸10min, 每孔加入150μ L吸附液, 3000r/min离心1min, 用排枪转移上清至一干净96孔板中, 每孔加入10μ L硅珠悬液, 室温静置5min, 3000r/min离心15s; 弃上清, 沉淀物中加入200μ L冷70%乙醇, 充分悬浮沉淀物, 3000r/min离心15s, 将乙醇弃去, 重复一次; 烘干; 每孔加入10μ L去离子水, 充分溶解沉淀物, 56℃保温15min, 3000r/min离心1min; 取上清液1μ L~3μ L进行PCR反应(试剂的配制见文献[1])。

1.2 PCR扩增

扩增引物采用AB公司提供的AmpFISTR Identifiler Plus试剂盒。扩增总体积6μ L, 其中含:PCR反应混合物2μ L, 引物1μ L, 模板1μ L~3μ L, 用去离子水补足体系。反应条件为:95℃× 11min× 1cycle, 94℃× 20s/59℃× 3min× 28cycle, 60℃× 20min。

1.3 检 测

扩增产物经ABI3100型遗传分析仪检测, 取1.5μ L扩增产物加入含有10μ L上样液(10μ L甲酰胺中加入0.2μ L Genescan 500LIZ作为分子量内标)中。

2 案 例

案例1 某年9月23日夜, 某镇徐某在家遭一男子入室抢劫并受伤。技术人员提取捆绑受害人的白色包装带送检, 要求检验嫌疑人的DNA, 笔者经对送检包装带分二十余段批量提取DNA, 结果其中两处检出同一未知男性的DNA, 且通过数据库比对, 该分型数据比中嫌人员童某, 案件告破。

案例2 某年5月16日, 某单位一台笔记本电脑被盗, 技术人员提取现场鼠标和电源线送检, 笔者经对送检物品分段转移提取共三十余处进行批量检验, 最终在鼠标和电源线上各检出一处男性DNA, 且分型一致, 经入库比对, 该数据比中嫌人员谷某, 并串并案件21起, 谷某供认不讳。

案例3 某年5月17日, 某市区一13个月的孩子及保姆被杀害在家中。技术人员提取了捆绑保姆的胶带送检, 笔者经在胶带的粘面、光滑面及胶带卷的侧面共提取了50多处批量检验, 终于在胶带卷的侧面成功地检出一处混合DNA, 为保姆与一男子DNA的混合, 经数据分析得到嫌疑人的分型数据, 为这起恶性命案的最后侦破提供了强有力的证据。

3 讨 论

随着DNA技术的发展, DNA检验的灵敏度越来越高, 微量生物检材的送检亦成为常规, 大量的盗窃、抢劫等刑事案件中均涉及微量生物检材的检验, DNA检验人员往往需一次检验二三十个案件八九十份检材, 96孔板批量提取DNA一次可最多处理九十多个样品, DNA提取及扩增前加样整个过程仅需2小时, 大大提高了检验效率。

在对现场检材进行转移时要用半干细棉签反复擦拭, 棉签过湿则转移不彻底, 棉签过干则脱落细胞转移不下来; 且擦拭范围要适中, 擦拭的范围过小则提取到的细胞过少而无法检验, 擦拭的范围过大则污染的可能性变大, 如案例1中对包装带的擦拭范围过大则容易检出混合DNA, 不利于案件的排查[2]

由于潜在物证肉眼无法判断细胞所在位置, 检验人员须通过案情结合生活常识分析所在位置, 传统的单管提取DNA法在检材较多时操作繁琐, 耗时长, 且易出错, 而对转移面积较大的检材(如电线、胶带、窗棂、绳索、大力钳等), 检验人员为了尽快出结果, 往往转移粗糙, 出现盲区, 而采用96孔板批量提取DNA则可以做到网格式提取, 提高检出率, 如案例3中, 如只在胶带上粗略地转移一二十处, 可能就得不到嫌疑人的数据, 而批量提取DNA的高效性使得检验人员更有耐心地开展更为细致的工作。

对于微量生物检材, 提取DNA时应尽可能浓一些, 最后只加10μ L去离子水, 加去离子水量过多导致扩增时模板太少, 扩增不成功, 加去离子水量过少易出现非特异性扩增。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 王林生, 苏勇, 顾林岗. 硅珠法提取PCR模板DNA[J]. 中国法医学杂志, 2000, 15(1): 36. [本文引用:1]
[2] 杨静开, 金胄. 脱落细胞类DNA提取方法的研究应用[J]. 刑事技术, 2009(3): 54-56. [本文引用:1]